Elisa

Os mtodos imunolgicos desenvolvidos para quantificar a concentrao de antgenos e anticorpos, por apresentarem grande sensibilidade e especificidade, tornaram-se tcnicas padronizadas para pesquisa e aplicaes clnicas. Entre esses mtodos, um dos mais usados o ELISA (Enzyme-linked immuno sorbent assay). Nesse mtodo, uma enzima, que reage com um substrato incolor para produzir um produto colorido, covalentemente ligada a um anticorpo especfico que reconhece um antgeno alvo. Se o antgeno estiver presente, o complexo anticorpo-enzima ir ligar-se a ele e a enzima catalisar a reao. Ento, a presena de produto colorido indica a presena de antgeno. Trata-se de um mtodo eficiente pois permite detectar quantidades de protena da ordem de nanogramas (10-9 g). No ELISA, deve-se selecionar um par de anticorpos, que podem ser monoclonais ou policlonais. O uso de anticorpos monoclonais resulta em maior especificidade. Dentre os diversos tipos de ELISA, destaca-se o ELISA SANDUCHE. Nesse mtodo, o anticorpo de um antgeno particular , inicialmente, adsorvido no well. Depois, o antgeno (soro, urina ou outra soluo contendo o antgeno) adicionado e se liga ao anticorpo. Finalmente, um segundo e diferente anticorpo ligado enzima adicionado. Nesse caso, a intensidade da reao proporcional quantidade de antgeno presente. Logo, permite mensurar at pequenas quantidades de antgeno. Quanto ao mtodo de revelao, pode ser direto ou indireto. No primeiro, a enzima reveladora encontra-se ligada diretamente ao segundo anticorpo, enquanto no indireto, a enzima apresenta-se ligada a um anti-anticorpo. O ELISA constitui a base do teste para infeco por HIV. Nesse teste, protenas virais (os antgenos) adsorvem nos poos (wells) da placa de ELISA. Em seguida, adicionado soro do paciente contendo anticorpos que se ligam aos antgenos. Finalmente, anticorpos ligados enzima ligam-se aos anticorpos humanos, propiciando a reao enzimtica com mudana de cor. EQUIPAMENTOS NECESSRIOS PLACA DE ELISA