Cromatografia de Afinidade
793 palavras
4 páginas
UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONASINSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FISIOLÓGICAS
Cromatografia de Afinidade
Eloysa Maria Rêgo
Kelly Custódio da Silva
Introdução
Cromatografia é um método físicoquímico de separação de substâncias;
Presença de duas fases:
Estacionária e móvel;
Separação ocorre devido a diferença entre as substâncias e suas fases;
Figura 1. Cromatografia de
Papel.
Pode ser uma análise qualitativa e quantitativa. 2
Histórico
Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919) inicia os estudos sobre cromatografia;
1899 à 1901 - Primeira pesquisa com a estrutura físico-química da clorofila das plantas;
1906 no seu segundo trabalho surge o termo “cromatografia”;
Origem do grego chroma ―cor, graphe
― escrever;
Figura 2. Mikhail Semenovich Tswett
3
(1872-1919)
Histórico
1959 – Campbbel, Leuscher, Leman;
Purificação de Tirosinase;
Cuatrecassas, Wilcheck, Anfinsen, Porath;
Figura 3. Wilhelm Leuschne.
Figura 4. Christian B. Anfinsen
1980 - 1982 Catalogadas 1800 publicações.
4
Princípio da Cromatografia
Figura 5. Esquema do Princípio da Cromatografia.
5
Cromatografia de Afinidade
Afinidade de ligação;
Os grânulos da coluna possuem um grupo químico covalentemente ligados.
Só um tipo de proteína da mistura complexa fica adsorvida na matriz, que é covalentemente ligada a fase estacionária; Figura 6. Princípio da Cromatografia de Afinidade.
Todas as proteínas são eluídas na etapa de lavagem;
6
Componentes da Cromatografia de Afinidade
Matriz;
Ligante;
Acoplamento do ligante na Matriz.
Figura 7. Componentes da Cromatografia de
Afinidade.
7
Matriz
São compostas de agarose e outros polisssacarídeos;
Estrutura para aumentar a área de superfície em que a molécula pode se ligar;
Deve ser ativada para que o ligante