contaminaçAO do solo

2. MATERIAIS E MÉTODOS
O estudo foi realizado na Universidade do Oeste Paulista (UNOESTE), em Presidente Prudente- SP, entre 29 de setembro a 10 de novembro de 2014. O solo utilizado foi coletado no campus da universidade, os quais foram devidamente separados em duas amostras, tratamento (1kg) e controle(1kg). Utilizou-se óleo de soja vegetal na dose de 1% (10ml) para contaminação do solo. Guardou-se as amostras no laboratório por uma semana.
CONTAGEM DE BACTERIAS AERÓBICAS
Em um erlenmeyr adicionou-se a amostra do solo (10g) com solução salina estéril. As bactérias foram diluídas em tubos de ensaio de solução salina (9ml). Repetiu-se a diluição ate que estivesse uma concentração final de 10-5.
A solução com diluição de 10-4 e 10-5. Com objetivo de verificar a presença de microrganismo no solo, foram incubadas e após duas semanas foi feita a contagem.
ANÁLISE DE RESPIRAÇÃO DO SOLO
Para determinar a atividade microbiana no solo através de um método que capta o CO2 que é liberado por NaOH (40ml) que foi colocado em um becker dentro de um frasco hermético com 50g de solo. Em um frasco hermético sem solo colocou-se um becker com 40 ml de solução de hidróxido de sódio servindo como o branco da análise. Fez-se a leitura de NaOH com condutivimetro após 24horas em cada frasco.
ATIVIDADE DE ENZIMA DESIDROGENASE
Para avaliação do metabolismo microbiano foram feitas análise enzimáticas no solo. Com a técnica TTC 1% (solução de tetrazolium) e leitura no espectrofotômetro em 530 nm.
EXTRAÇÃO DE DNA DO SOLO
Em tubos devidamente identificados com 0,25 g de solo, adicionou-se 400 uL de tampão fosfato de sódio(0,12M pH com 1% de PVPP) e 5 esferas em cada tubo agitando por 2 min, em seguida centrifugou-se 6000 RPM por 5 min. Transferindo o sobrenadante para outro tubo.
Acrescentou-se 40 uL de CTAB 10% no sobrenadante agitando por 1 minuto, em seguida adicionou-se 250 uL de fenol saturado com Tris-HCl, incubando por 10 minutos em temperatura ambiente, agitando a cada 5