Coloração de gram

INTRODUÇÃO

Coloração de Gram é uma técnica de coloração para diferenciação de microrganismos através das cores, para serem observados em microscópio óptico. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactérias, após serem tratadas com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas. Assim, as que ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, foram chamadas de Gram-negativas. A técnica de Gram é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo muito utilizada atualmente, como técnica de rotina em laboratórios de Microbiologia e de Análises Clínicas.

1. MATERIAL E PROCEDIMENTOS

Culturas bacterianas em meio sólido, corante cristal violeta, corante fucsina básica, lugol, etanol-acetona (1:1 v:v), lâmina de microscopia, microscópio óptico e bico de Bunsen. Preparar esfregaço bacteriano, com auxílio de alça de inóculo. Adicionar 1 gota de água sobre a lâmina. Espalhar, utilizando a alça de inóculo. Flambar rapidamente a lâmina acima da chama de um bico de Bunsen, para fixar e “queimar” a bactéria. Inundar a lâmina com corante cristal violeta. Deixar em repouso por um minuto. Descartar o excesso de corante e enxaguar a lâmina com água. Cobrir toda a superfície da lâmina com lugol. Deixar em repouso por um minuto. Descartar o excesso do fixador. Com a lâmina inclinada, despejar algumas gotas de etanol-acetona, para remover o complexo cristal violeta-lugol. Este procedimento deve ser rápido, não ultrapassando 5 segundos. Em seguida, enxaguar a lâmina com água para remover o excesso de solvente. Cobrir toda a superfície da lâmina com o corante fucsina básica. Deixar em repouso por 30 segundos. Enxaguar a lâmina com água e tocar as bordas com papel absorvente para remoção do excesso de água. Deixar secar.