Bioquimica

RESULTADOS E DISCUSSÃO
I. Determinação de açúcares redutores pelo Método de Somogyi-Nelson

a) Preparo de soluções de substrato (sacarose) de diferentes concentrações a partir da solução de sacarose 10mg/mL.

Para preparar 4mL das soluções, utilizou-se tampão acetato 0,05 Mol/L, pH 5,0. A fim de obter os substratos em diferentes concentrações, foi preciso calcular os volumes de solução de sacarose 10mg/mL e, com isso, também foi possível calcular o volume necessário de tampão. A seguir são mostrados como esses cálculos foram feitos e os resultados dos mesmos são apresentados na Tabela 1:

Como exemplo dos cálculos feitos, tem-se a concentração de sacarose de 1mg/mL:

Tabela - Concentrações de Sacarose
Tubos
Concentração Sacacarose (mg/mL)
Volume Solução Sacarose 10mg/mL
Volume Tampão
1
1
0,4
3,6
2
2
0,8
3,2
3
3
1,2
2,8
4
4
1,6
2,4
5
5
2,0
2,0
6
6
2,4
1,6
7
7
2,8
1,2
8
8
3,2
0,8
9
9
3,6
0,4
10
10
4,0
0

b) Cálculo da velocidade de reação para cada concentração de substrato (sacarose)

Após medir-se a absorbância de todos os tubos após a ocorrência da reação, foram obtidos os seguintes resultados:

Tabela - Concentração sacarose x Abs 540nm
Tubo
Concentração de Sacarose [S]
Determinação de Açúcares Redutores Abs 540nm
1
1mg/mL
0,056
2
2mg/mL
0,108
3
3mg/mL
0,156
4
4mg/mL
0,174
5
5mg/mL
0,224
6
6mg/mL
0,221
7
7mg/mL
0,278
8
8mg/mL
0,295
9
9mg/mL
0,343
10
10mg/mL
0,363

Para obter-se a concentração de açúcares redutores formados, foi feita a curva padrão de glicose para o espectrofotômetro Femto I, com base nos valores dados, os quais constam na Tabela 2 a seguir:

Tabela 3 - Concentração de glicose x Abs 540nm
Concentração de glicose mg/mL
Abs 540nm
0,025
0,044
0,05
0,116
0,1
0,211
0,15
0,321
0,25
0,502
0,3
0,644
0,4
0,848

Gráfico - Curva Padraõ de Glicose
Com a equação da reta aproximada da curva padrão de glicose,
,