Bioquimica

4.3 Determinação da atividade da arginase e inibição enzimática

O experimento iniciou-se com o preparo de 3 microtubos com os seguintes reagentes : (CP): Controle Postivio =L-Arg + Agua + Enzima Arginase
(CN): Controle Negativo = L-Arg + Agua
(TI): Tubo de Inibição L-Arg + Agua + Enzima Arginase + Inibidor Quercetina
Os 3 Microtubos foram incubados para melhor ação da enzima e do inibudor
A diluição da quercetina ,um antioxidade de origem vegetal encontrado em cebola brócolis e frutas foi usada nesse experimento como substância inibidora , foi transferida em dilução seriada para os microtubos , por isso a concentração deste inibidor foi diminuindo de CN para TI
A enzima arginase usada no experimento foi responsável pela conversão do aminoácido L-arginina em ornitina e ureia. Assim, ao pipetar a enzima Arginase e homogeneizar, ocorreu a seguinte reação:
L-arginina + enzima arginase  L-ornitina + ureia
Aos cinco tubos de ensaio de T1 a T5 o R1 (enzima uréase) foi adicionado , além disso aos respectivos tubos foram adicionados :
T1: Água
T2: Tubo CP
T3: Tubo CN
T4: Tubo TI
T5: Ureia Padrão
Todos os Tubos de T1 a T5 foram incubados para melhor ação da Enzima Uréase ocorrendo a seguinte reação
Ureia + enzima uréase (R1)  CO2 + 2NH3

A enzima uréase é altamente específica para a ureia. Ela catalisou a reação de hidrólise da ureia formando dióxido de carbono e amônia. Em todos os tubos de T1 a T5 foi adicionado R2 (salicilato) a reação que ocorreu foi:

Amônia (NH3) + salicilato  azul de endofenol

O azul de endofenol mediu a absorbância para quantificação através do espectrofotômetro. Depois de zerar o espectrofotômetro com o tubo T3 , utilizou-se o tubo CP para observar o funcionamento da enzima sem inibidor e também como referência para o calculo da atividade enzimática e o tubo T5 foi utilizado para testar o funcionamento de R1 e R2, ao medir a absorbância no espectrofotômetro obtiveram-se as medidas apresentadas na