biomédico

ANÁLISE DA EXPRESSÃO GENICA

Centro Universitário Católica de Santa Catarina – Campus Joinville
Biomedicina – Disciplina de Biologia Molecular

1 ANÁLISE BÁSICA A expressão gênica é o processo pelo qual a informação contida em um gene é traduzido em estruturas presentes em um determinado tipo celular (mRNA ou proteínas).

1.1 PRINCÍPIOS DE TRIAGEM
1.2 MÉTODOS
1.2.1 PCR

1.2.2 NORTHERN BLOT

O método de Northern Blot se baseia na transferência de RNAs bandeados por eletroforese para uma membrana adequada, em geral de nylon (FIGUEIRA, 2010).
Figueira (2010) afirma também que o processo pode ser feito por campo elétrico (os RNAs são negativos e migram para o pólo positivo) ou arraste hidrodinâmico. As membranas de Northern blot podem ser hibridizadas com sondas de DNA ou RNA. O nome northern é uma alusão ao nome Southern, do inventor da transferência análoga de DNA. É um método altamente sensível para a detecção de sinais fracos. É um processo lento, consome recursos, limitado ao estudo de poucos genes e exige uma grande quantidade de RNA e uma sonda marcada radioativamente.

Método de Northern Blot

Segundo estudo realizado na Faculdade de Ciências – Universidade de Lisboa, este método envolve as seguintes etapas:
(A) Misturas de moléculas de RNA de cadeia simples (Hibridação Northern) que são separadas por electroforese com base na dimensão.
(B) As moléculas de RNA são desnaturadas por exposição do DNA a condições alcalinas desnaturantes, são transferidos para membranas de nitrocelulose ou de nylon.
(C) A membrana, contendo os ácidos nucleicos ligados, é cuidadosamente removida do gel.
(D) A membrana é depois colocada num saco de plástico selado ou numa garrafa de hibridação, juntamente com a solução de hibridação (uma solução salina tamponada) e a sonda de DNA ou de RNA, radioactivamente marcada e na forma de cadeia simples, por um período de tempo prolongado em condições que favorecem a