Biologia molecular

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PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE MINAS GERAIS
Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde
Curso de Ciências Biológicas

BIOLOGIA MOLECULAR
Relatórios de Aulas Práticas
Clonagem

Belo Horizonte

2009

RELATÓRIOS DAS PRATICAS 10, 11, 12,13.

TÍTULO: Clonagem – Visualização prática

OBJETIVO Através da prática, conhecer experimentalmente a técnica de clonagem, que diferentemente da técnica de PCR, a amplificação in vivo não é uma reação enzimática. Conhecer as etapas envolvidas, seus constituintes, o princípio e a importância desse método utilizado na Biologia Molecular.

INTRODUÇÃO Nas últimas décadas, com o desenvolvimento da Biologia Molecular e das demais áreas afins, uma imensa variedade de avanços tecnológicos foi conquistada, graças à atividade de pesquisa de diversos grupos em todo o mundo. Os avanços se deram principalmente, no sentido de se isolar, alterar e reintroduzir, em laboratório o material genético, para depois ser reitroduzido em microrganismos, sendo a essência dessa tecnologia a possibilidade de gerar espécies melhoradas ou novas (LEWIN, 1994). Assim foi possível a realização da clonagem, ou seja, a produção de células ou de moléculas de DNA idênticas, in vitro, a a partir de um único ancestral. Os clones seriam, então,as cópias deste modelo. Segundo FAHEL (2006) a técnica de clonagem é útil para construção de bibliotecas de gens e expressão de proteínas. Para tal é inserido em um vetor, como plasmídeos, um fragmento do DNA que se quer estudar. Alguns vetores têm seu DNA modificado para otimizar a inserção de moléculas de DNA e facilitar a seleção de colônias bacterianas que contém o plasmídeo com o fragmento de DNA desejado. O conceito básico de clonagem posicional compreende a identificação inicial da localização cromossômica, onde se suspeita residir o gene associado a um dado fenótipo. Os passos subseqüentes envolvem a redução da área crítica ao