Análises microbiológicas de bact gram + e gram -

1672 palavras 7 páginas

Ágar citrato de Simmons
Princípio: É utilizado para diferenciar gêneros e espécies de enterobactérias e não fermentadores. Verifica a capacidade da bactéria de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono, juntamente com sais de amônia, alcalinizando o meio, o indicador é o azul de bromotimol.
Fórmula:
Fosfato monobásico de amônio | 1 g | Fosfato dipotássio | 1 g | Cloreto de sódio | 5 g | Citrato de sódio | 2 g | Sulfato de magnésio | 0,2 g | Azul de bromotimol | 0,08 g | Ágar ágar | 15 g | Água destilada | 1000 mL | pH final = 6,9 |
Preparo: Meio na fórmula comercial de pó desidratado, não havendo necessidade de ser formulado. Meio utilizado Agar Citrato de Simmons.
Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante, adicionar em balão e aquecer levemente sob agitação constante até completa dissolução do ágar.
Em seguida, distribuir 3 mL em tubos 12 mm x 75 mm, tamponar cada tubo com rolha de algodão hidrófobo, autoclavar a 120° C por 15 minutos.
Após autoclavação, inclinar os tubos um a um, num ângulo de 45° para solidificar a temperatura ambiente. Após completa solidificação armazenar na geladeira em recipiente fechado, para que o meio não desidrate.
Conservação e validade: Conservar de 4 a 10° C de 6 a 8 semanas; Após este período realizar controles negativo e positivo semanalmente.
Controle de qualidade
Positivo: Klebsiella pneumoniae ATCC 13883.
Negativo: Escherichia coli ATCC 25922.
Inoculação: Inocular a bactéria fazendo estrias apenas na superfície inclinada do meio; Incubar em estufa bacteriológica a 37ºC por 18 a 24 horas.
Interpretação:
Cor original do meio: verde
Positivo: cor azul ou crescimento no local do inoculo.
Negativo: não há crescimento e a cor permanece inalterada.

Leitura inicial com 24 horas, se o resultado for positivo: encerrar o teste, se o resultado negativo ou houver dúvida: reincubar por mais 24/48 horas.
*Após preparo o meio apresenta coloração âmbar claro.
REFERÊNCIA:

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