Plasmideos

de DNA Bactérias e seus plasmídeos A Tecnologia do DNA Recombinante • O que é? Um conjunto de técnicas que visa o estudo de um gene. A técnica central é a clonagem molecular. • Por que falar do dogma central da biologia molecular? Porque quando se estuda um gene, se estuda a proteína que ele codifica. A Tecnologia do DNA Recombinante • Clonagem molecular: • Inserto + vetor ~> DNA recombinante • Processo da transformação • Tipos de vetores: • Plasmídeos •…

04 b. CROMOSSOMA 04 c. BACTERIÓFAGO i. CICLO LÍTICO 04 ii. CICLO LISOGÊNICO 05 d. PLASMÍDEOS 05 2. DESENVOLVIMENTO 06 a. MUTAÇÃO 06 b.

entrada do plasmídeo recombinante. Utilizado em células bacterianas. DNA (-) +++++++++++ Tratamento com CaCl2 Fosfolipídeos possuem carga - Eletroporação: As células são submetidas a uma alta voltagem (choque elétrico) que provoca uma desestabilização da membrana externa e a formação de poros, possibilitando a entrada do DNA para o interior da célula. Utilizado para bactérias, leveduras, fungos filamentosos, células animais e vegetais. Clonagem de DNA utilizando…

Resistência Bacteriana Plasmídeos Tipos de Plasmídeos Os plasmídeos são moléculas circulares duplas de DNA capazes de se reproduzir independentemente do DNA cromossômico.Ocorrem geralmente em bactérias e por vezes também em organismos eucarióticos unicelulares (ex: o anel de 2-micra em Saccharomyces cerevisiae) e células de eucariotas superiores. O seu tamanho varia entre poucos milhares a mais de cem mil pares de bases. Existem entre uma, para grandes plasmídeos, até…

TRANSPONSONS, PLASMÍDEOS E BACTERIÓFAGOS Alexandre Lopes Fabrício Pereira Almeida Felipe Augusto R. Teixeira Jesualdo Campos Pereira Leonardo da Silva Borges BOM JESUS-PI FEVEREIRO - 2014 SUMÁRIO ELEMENTOS GENÉTICOS MÓVEIS-----------------------------------------------------03 TRANSPOSONS--------------------------------------------------------------------------------03 PROCESSOS DE TRANSPOSIÇÃO------------------------------------------------------05…

Materiais e métodos Cepas bacterianas e plasmídeos • Escherichia coli DH10B [F - mcrAΔ (MRR-hsdRMS-mcrBC) Φ80d lacZΔM15 ΔlacX74 Deor recA1 endA1 Δ ara D139 (ara-leu) 7697 GALU galK rpsL nupG λ-] Preparação de plasmídeos • E. coli BL21 (DE3) [E. coli BF - dcm ompT hsds (r B - m B - ) λ gal (DE3)] Expressão da proteína • Plasmídeo pET28-GST (base pET 28) plasmídeo de expressão Construção do Materiais e métodos Construção do plasmídeo recombinante pET28-GST-gG2 Fragmento de

específicas – zonas de restrição fragmentando o DNA em fragmentos mais pequenos que contêm na extremidade a sequência reconhecida. Utilizando as mesmas enzimas durante tudo o processo, tanto o plasmídeo como o fragmento de DNA receptor irão possuir extremidades em que os fragmentos de DNA e do plasmídeo são complementares. Posteriormente as ligases do DNA permitem catalizar as reacções em que as extremidades livres são ligadas a novas sequências de DNA - novo gene - por…

ou 2,0 ml; Cubeta de eletroporação; Cubeta de espectrofotômetro; Tubos tipo falcom de 50 ml; Centrifuga refrigerada; Eletroporador ; Banho Maria; Estufa bacteriológica com e sem agitação; Curva de diluição de plasmídeos para avaliação da eficiência de eletroporação; Plasmídeos; Neste trabalho, foram utilizadas duas vias para tornar as células competentes ,sendo elas , transformação por eletroporação,e transformação por cloreto de cálcio(CaCl2). Transformação de E. coli com…

interesse, produtor de uma proteína imunogênica em um vetor bacteriano (plasmídeo). Depois vai ser estabelecida a linhagem celular a ser utilizada para a produção e purificação do plasmídeo para a geração de um banco de células referência (BCR) visando estar dentro dos padrões de controle de qualidade para os posteriores testes clínicos. Depois de determinado o microorganismo, nesse caso a E. coli DH5α transformada com o plasmídeo de interesse, a bactéria será cultivada a 37ºC em meio LB…

Ano letivo 2013/2014 vetores Plasmídeos Vírus Cromossomas artificiais - A dimensão do DNA a transportar é o principal elemento seletivo do vetor a usar. - A ordem de grandeza do DNA a transportar é dada em Kb (1Kb = 103 pares de bases). Ano letivo 2013/2014 Plasmídeos Muitas bactérias possuem, para além da molécula de DNA principal, pequenas moléculas de DNA em cadeia dupla - os plasmídeos. Geralmente os genes dos plasmídeos não são essenciais à sobrevivência da