A fosfatidilserina na membrana regula a carga da superfície e a localização de proteínas

A fosfatidilserina na membrana regula a carga da superfície e a localização de proteínas
Tony Yeung, et al.

Introdução teórica

A carga negativa da superfície do folheto interno da membrana plasmática determina a localização de proteínas com cargas policatiónicas. A negatividade única do folheto interno da membrana plasmática tem sido atribuída, em parte, ao seu conteúdo polifosfoinositídico. Apesar de serem polivalentes, os polifosfoinositídeos representam apenas uma pequena fracção dos fosfolípidos presentes na membrana plasmática e são menos abundantes que a fosfatidilserina (PS) a espécie aniónica predominante. O contributo da PS para a localização e retenção de proteínas catiónicas é incerta devido à falta de sondas adequadas para monitorizar a distribuição de PS em células vivas.

Procedimento e Resultados

Por isso, os cientistas desenvolveram uma sonda para monitorizar esta distribuição. A lactaderina, uma glicoproteína do leite, liga a PS, numa forma independente de cálcio, com o seu domínio C2. O domínio C2 da lactaderina (Lact-C2) foi utilizado para gerar biosensores fluorescentes. A Lact-C2 recombinante foi gerada em bactérias e purificada para testar a sua afinidade com lipossomas contendo PS, através de transferências de energia por ressonância de fluorescência. Revestiram microesferas de vidro com bicamadas fosfolipídicas que continham 20% de PS e 80% de PC (liposferas). Aqui comprovaram que os lipossomas (de composições variadas) são eficazes na deslocação do Lact-C2 presente nestas microesferas. Os lipossomas que continham 5 a 20% de PS reduziram a Lact-C2 ligada às liposferas de uma forma proporcional à concentração, enquanto que os lipossomas que contém apenas PC ou níveis fisiológicos de fosfoinisitídeos (PI) não tiveram efeito.
A Lact-C2 fundida à proteína fluorescente verde (GFP – Lact-C2) liga-se exclusivamente a grânulos revestidos de PS, mas não aos revestidos de PC ou outros tipos de fosfolípidos aniónicos. Estes dados