Vitrificação de ovócitos bovinos

VITRIFICAÇÃO DE OVÓCITOS BOVINOS COM A UTILIZAÇÃO DE MICROPIPETAS DE
VIDRO OU PALHETAS ESTIRADAS
BOVINE OOCYTE VITRIFICATION WITH GLASS MICROPIPETES OR OPEN PULLED STRAW
Alceu Mezzalira1; Arnaldo Diniz Vieira2; Fabiano Buss Cruz3;
Dilmar Paulo Barbieri4; Juliana Cardoso Damiani4
RESUMO
Com o objetivo de avaliar diferentes formas de envase no processo de vitrificação, complexos cumulus oophorus (CCOs) obtidos de folículos entre 2 e 8mm foram divididos aleatoriamente em três grupos e submetidos a maturação em TCM 199 sais de Earle com 10% de soro de égua em estro (SEE), em estufa a 39oC, com atmosfera de
5% de CO2 e 95% de umidade relativa. Com 22 horas de cultivo os grupos a serem vitrificados foram submetidos a pipetagens sucessivas para o desnudamento parcial, em uma placa contendo meio de manutenção (TCM-Hepes com 10% de soro fetal bovino - SFB), sendo então expostos a uma solução de equilíbrio composta por 400µl de meio de manutenção, adicionado de 50µl de EG e 50µl de DMSO, por 30 segundos. Em seguida foram transferidos para a solução de vitrificação composta por 300µl de uma solução de sacarose 0,8M em TCM-Hepes com 20% SFB, acrescido de 100µl de EG e 100µl de DMSO, envasados em grupos de cinco, em micropipetas de vidro (MV T1) ou palhetas estiradas (OPS T2) e vitrificados. O reaquecimento foi realizado pela imersão direta das MV e
OPS numa solução de Sacarose 0,3M em meio de manutenção, a 37 –
38ºC, onde os CCOs permaneceram por cinco minutos, quando foram transferidos para uma solução com 0,15M de sacarose por mais cinco minutos, antes de retornarem para o meio de manutenção. A seguir os ovócitos dos dois grupos retornaram ao meio de maturação por mais duas horas. A partir de então, todos os grupos foram submetidos aos mesmos procedimentos de fecundação e cultivo. Para a fecundação utilizou-se sêmen selecionado pelo processo de migração ascendente (swim-up), em meio TALP-SPERM, utilizando-se uma concentração final de 1 x