CRIOPRESERVA O DE S MEN

CONGELAMENTO DE SÊMEN E SUA EFICIÊNCIA NA INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL DE CÃES
Principais métodos para avaliação espermática em cães :
TESTE OBJETIVO PROCEDIMENTO REFERÊNCIA
Teste Hiposmático
Integridade de membrana (teste indireto) Solução hiposmótica por 30 minutos a 37°C. Membrana intacta = edema e cauda enrolada Kumi-Diaka, 1993
Análise
computadorizada de sêmen (CASA)
Avaliação da motilidade espermática
Caracterização da cinética dos sptzs. Permite a identificação de subpopulações espermáticas
Rijsselaere et al.,2003
Niżański et al.,2009
Teste de ligação em zona pelúcida
Avaliação do potencial fertilizante dos sptzs
ZBA – oócitos homólogos
HZA – hemizona microscópio de contraste de fase Rijsselaere et al., 2005
Strom-Holst et al.,2001.
Sondas fluorescentes e citometria de fluxo
Integridade de membrana e avaliação de vivos e mortos Uso combinado de sondas: iodeto de propídio (PI) e acetato de carboxifluoresceína SYBR-14 + PI sptz íntegro – verde sptz lesado – vermelho
Rijsselaere et al., 2005
Silva e Gadella, 2006

Reação de capacitação Clortetraciclina fluorescente
+Hoechst 33258 – avaliação da % de células vivas e reação de capacitação
Ptrunkina et al., 2004

Reação do acrossoma
Lecitinas conjugadas:
(FITC-PNA) ou (FITC-PSA).
Ausência de fluorescência = acrossoma intacto, presença de fluorescência = reação de acrossoma
Silva e Gadella, 2006

Mitocôndria
Rodhamina 123 – sonda seletiva para mitocôndria funcional Gravance et al., 2001

Integridade do DNA
Acridine Orange (OA)
Verde: DNA intacto
Vermelho: DNA desnaturado. TUNEL
Choran et al., 2006

Segundo Linde-Forsberg (2005), de todos os procedimentos de IA realizados em cães na Europa, 50 a 55% são realizados com sêmen fresco, 10% com sêmen resfriado e 35 a 40% com sêmen congelado. No Brasil, a despeito da ausência de estatísticas precisas, a rotina de IA com sêmen fresco é maior quando