Técnicas de preparaçao definitivas

Método de coloração cromossómica com Orceína Acética, utilizando os vértices vegetativos da raiz da cebola (Allium cepa), para estudo da Mitose

Lísia Lopes

Método de coloração cromossómica com Orceína Acética, utilizando os vértices vegetativos da raiz da cebola (Allium cepa), para estudo da Mitose

1. Colheita material biológico: • Colocar os bolbos de Allium cepa a germinar e após 2 a 3 dias cortar os ápices radiculares com 1,5 a 2 cm de comprimento

2. Fixação e conservação • Fixação utilizando solução de CARNOY – Álcool absoluto mais Ácido Acético numa proporção de 3:1, no mínimo durante 15 min. • Conservar os v.v. raiz de Allium cepa em Álcool a 70%

Método de coloração cromossómica com Orceína Acética, utilizando os vértices vegetativos da raiz da cebola (Allium cepa), para estudo da Mitose

3. Elaboração de preparações temporárias
Material de laboratório • Orceína Acética • HCl 1N • Lamparina

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Vidro-de-relógio Papel de filtro Pinça e agulha espatulada v.v. Allium cepa

Procedimento experimental
• Num vidro-de-relógio colocar 9 gotas de orceína-acética e 1 gota de ácido clorídrico (HCl 1N) • Colocar os v.v. da raiz de Allim cepa e aquecer lentamente numa lamparina até emissão de vapores (hidrólise das células em meio ácido); (Atenção: não deixar ferver!) • Deixar repousar uns minutos • Transferir os vértices para uma lâmina numa gota de orceína acética fresca • Com ajuda de uma agulha espatulada, cortar apenas o ápice radicular e esmagar ligeiramente – esfregaço ou squash • Retirar o excesso de corante com papel de filtro • Observar ao MO

Corantes e soluções:

Orceína acética
• é um corante natural, letal, básico, generalista e homocromático (apenas confere uma cor), muito utilizada, com bons resultados, na coloração dos cromossomas (vermelho intenso). • Geralmente atua associada ao ácido acético diluído, que, por diminuição do pH, torna mais específica a coloração, isto é, por hidrólise das células em meio ácido, há