Trabalho sobre PCR

PCR – REPLICAÇÃO DE CADEIA DE POLIMERASE

A PCR possibilita a síntese de fragmentos de DNA, fazendo uso da enzima DNA-polimerase (replicação do material genético).
Esta enzima sintetiza uma sequência complementar de DNA, desde que um pequeno fragmento chamado iniciador, já esteja ligado a uma das cadeias do DNA no ponto escolhido para o início da síntese. Os iniciadores definem a sequência a ser replicada e o resultado obtido é a amplificação de uma determinada sequência DNA com bilhões de cópias .

UTILIZAÇÃO DA TÉCNICA DE PCR

Usados em laboratórios de investigação medica e biológica (forense)
Diagnóstico médico;
Mapeamento genético;
Detecção de doenças hereditárias;
Clonagem de genes;
Testes de paternidade;
Criação de organismos transgênicos.

EQUIPAMENTOS/MATERIAIS UTILIZADOS

Termociclador - Permite realizar os ciclos de temperaturas necessários para uma reação em cadeia de polimerase de amplificação de DNA.
Pipetas que tenham ponteiras autoclavadas (que podem ir a autoclave)
Placas ópticas de 96 poços e selos específicos
Capela/Câmara de Fluxo Laminar

ETAPAS

Desnaturação: Nessa fase, as moléculas de DNA a serem amplificadas são expostas a uma temperatura elevada de aproximadamente 90°C por 30 segundos. Essa temperatura extrema obriga as fitas do DNA se separem, tornando uma molécula de dupla fita em duas fitas independentes e separadas.
Anelamento: Nesse processo, a temperatura é resfriada de 55°C entre 65 °C por aproximadamente 30 segundos. Após o resfriamento os primers (iniciadores) se ligam às moléculas alvo , formando molécula hibridas.
Extensão: Nessa etapa a temperatura é aumentada para 72°C podendo variar de 30 segundos para 1 minuto. Nessa fase a enzima Taq DNA polimerase se liga aos primers que estão relacionado às fitas de DNA alvo que terminam de sintetizar o restante de ambas as fitas de DNA
Revelação: Detectar a presença de produtos amplificados. Em geral isso é realizado pela eletroforese em