Trabalho AVA

Principio do PCR (Polymerase chain reaction ou Reação da polimerase em cadeia):
Principio da PCR (Polymerase chain reaction ou Reação da polimerase em cadeia): O principal propósito da PCR é fazer um número imenso de copias de um determinado fragmento gênico, ao qual o tamanho pode variar de poucos pb (pares de bases) até milhares de pb. A técnica explora função natural da enzima chamada de taq – polimerase, extraída da bactéria Thermus aquaticus, esta enzima é semelhante à enzima DNA – polimerase que é capaz de sintetizar DNA a partir de seus precursores no sentido 5’ Þ 3’. Para catalisarem essa síntese, os precursores de DNA devem estar presente sob a forma de desoxirribonucleotídeos trifosfatos (dATP, dTTP, dGTP e dCTP).
Para utilizar esta técnica é necessário ter um conhecimento prévio da seqüência dos genes a serem amplificados, e a partir disso são sintetizados dois primers ou iniciadores, ou seja, é a partir deles que se inicia a síntese do DNA pela enzima taq – polimerase. A síntese se desenvolve sempre no sentido 5’ Þ 3’.
Ciclos da PCR: Fase de desnaturação (94 -96°C): fase onde ocorre o desenrolamento da fita dupla do DNA através da quebra das pontes de hidrogênio entre as bases pareáveis (A – T, G – C), dando origem a duas fitas simples de DNA sobre as quais a síntese posteriormente vai ocorrer. Fase de hibridização ou anelamento (50-54°C): nesta fase os “primers” se ligam, especificamente, às suas seqüências homologas correspondentes no DNA. Fase de extensão do DNA (72-76°C): fase onde ocorre a síntese de uma nova fita antiparalela sobre a fita anteriormente desnaturada, a enzima taq – polimerase catalisa esta reação. Para se ter uma idéia do poder da PCR, após 30 ciclos (numero de ciclos utilizados para a maioria das reações) um único fragmento gênico apresentará mais de 1.000.000.000 de copias.
Reações de PCR mais comuns: RT-PCR (Reverse Transcriptase Chain Reaction): O primeiro passo da