Tecnologias de manipulação de dna

Atualmente, uma série de novas técnicas permite ao pesquisador a análise detalhada da estrutura molecular do DNA e, por consequência, do material genético de um ser vivo. Esta análise permite, por sua vez, o isolamento e a amplificação de um segmento de DNA, o seu seqüenciamento, identificação e manipulação. O Projeto Genoma, por exemplo, pretende, através destas técnicas, identificar toda a seqüência de cerca de 3 bilhões de pares de bases do genoma humano - 50.000 a 100.000 genes!! Esta abordagem permitirá a identificação de genes relacionados a doenças genéticas específicas, a abre a possibilidade de diagnóstico e até tratamento estas doenças a nível molecular.
Sequenciamento do DNA: Duas técnicas, surgidas no final dos anos 70, são empregadas para o seqüenciamento de fragmentos de nucleotídeos:
Método Químico ou de Maxam-Gilbert Método Enzimático ou de Singer Em ambos os casos, é possível se definir com precisão a seqüência exata de nucleotídeos de um segmento de DNA
Amplificação de um Segmento de DNA: O enorme tamanho e a imensa variabilidade da molécula do DNA são os principais obstáculos ao isolamento e sequenciamento de genes. Assim, técnicas especiais são necessárias para a seleção e amplificação de partes da molécula do DNA, gerando fragmentos menores e mais facilmente analisáveis. São duas as metodologias empregadas atualmente:
A Reação em Cadeia da Polimerase - "Polimerase Chain Reaction", ou PCR. A Clonagem de Genes
"Polimerase Chain Reaction" - PCR
Este método - mais recente - de isolamento e amplificação de um segmento de DNA - envolve a produção "in vitro" de milhões de cópias do segmento em estudo. O processo exige a utilização de "primers" que isolam o segmento a ser amplificado, da enzima DNA Polimerase, e ocorre em 3 etapas:
A desnaturação da dupla fita do DNA, em alta temperatura - 90oC O pareamento dos "primers", a baixa temperatura - 37o C A duplicação do segmento isolado através da reação da DNA polimerase. O processo é cíclico e pode