Síntese de DNA

5ª AULA (10/06/2013)
TEMA: Síntese do DNA “in vitro” / Síntese do DNA “in vivo”
Kornberg- 1960: Primeiro a ver a possibilidade de sintetizar DNA in vitro
4139565159385DNA molde + trifosfato Deoxinucleotídeos ( ATP e Magnésio) = DNA↑
371094081915*Extrato de bactérias
00*Extrato de bactérias

*romper de células para extrair o que as mesmas possuíam.
- Esse experimento tinha como finalidade simular o funcionamento de uma célula dentro de um tubo de ensaio “in vitro”.
- Mas ele quis ir além, queria provar que o DNA recém-sintetizado provinha do DNA molde. (Lembrando que segundo Crick; DNA vem de outro DNA existente). Logo ele através dos cálculos de bases ele pode concluir que davam o mesmo valor, validando o fato de serem iguais.- Mas, o que de fato tinha no extrato de bactérias que trabalhava em conjunto com o DNA molde para que houvesse a síntese? Resposta: Enzimas. Tais enzimas chamadas de DNA POLIMERASE.
- O experimento repetido apenas com o uso da enzima, e não necessariamente com o extrato de bactéria haveria síntese. Logo, concluímos que a síntese é uma polimerização.
TRABALHANDO COM A ESCHERICHIZ COLI:
Selvagem- Sintetiza DNA polimerase 1
Mutante: Não sintetiza DNA poimerase1
- Porém ambas sintetizam DNA
- Foi possível entender que existem outras enzimas que também sintetizam DNA. Hoje nós sabemos que existe a POLIMERASE I, II e III.
- Mutante é mais sensível aos raios UV (esta danifica o DNA) que a selvagem. Isto acontece devido a presença do DNA polimerase I que tem como característica a função também de reparo.
OBS: Hoje se sabe que o DNA polimerase III é a enzima mais importante e ter encontrado a polimerase I se deu talvez devido a grande quantidade existente.
Diluição Decimal:
- Sabe-se que numa cultura de bactérias uma única célula pode dar origem a uma colônia de bactérias. A retirada de uma única gota da solução de bactérias quando espalhadas formam um filme de bactérias homogenia, pela fato de haver grande