Separaçao da hemoglobina e albumina por cromatrogafia troca ionica

INSTITUTO POLITÉCNICO SAÚDE DO NORTE
ESCOLA SUPERIOR DE SAÚDE DO VALE DO AVE Relatório de Bioquímica 1º Ano de Fisioterapia

Separação da Hemoglobina e da Albumina por Cromatografia de Troca Iónica

TRABALHO ELABORADO POR:

Ana Granja Gr Carla Santos Cátia Pentieiros

V. N. Famalicão, 15 de Novembro de 2011

TRABALHO PRÁTICO Nº3: separação da hemoglobina e da albumina por cromatografia troca iónica OBJECTIVOS: Separar uma mistura de hemoglobina e outra de albumina, através da cromatografia troca iónica, utilizando a (DEAE)-Celulose como fase estacionaria. RESULTADOS: Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Absorvância (em nm) 2,075 2,159 2,216 2,325 2,445 2,564 2,367
1º Pico – separação da Hemoglobina

Tampão inicial (Tris 0.1 M pH 7.5, 50mM de NaCl)

Tubos 8 9 10 11 12 13 14

Absorvância (em nm) 2,524 2,554 0,574 0,402 0,318 0,377 0,358
2º Pico – separação da Albumina

Tampão final (Tris 0.1 M pH 7.5, 250mM de NaCl) TABELAS: Valores da Absorvância (D.O) lidos no espetrofotómetro a λ=280 nm. GRÁFICO: representativo da separação da hemoglobina e albumina por cromatografia iónica (em anexo).
Saúde 2011/2012 Escola Superior de Saúde Vale do Ave – 2011/2012 2 1º ano de Fisioterapia - Relatório de bioquímica

DISCUSSÃO DE RESULTADOS: Para separar as proteínas (hemoglobina e albumina) por cromatografia troca iónica, utiliza-se (DEAE)-Celulose, como fase estacionária, com pH entre 2 e 9, carregada positivamente, comportando-se como trocadora de aniões. A hemoglobina A1,a que existe em maior percentagem no Homem adulto tem como ponto isoeléctrico 7.42, valor muito próximo do pH do tampão. A hemoglobina A2 cujo ponto isoeléctrico 6.9 é também relativamente próximo do pH do tampão. Devido a estas condições, estas proteínas apresentam uma menor afinidade com a fase estacionária, sendo assim as primeiras a serem separadas. Por sua vez, a albumina foi a última proteína a ser separada pois apresenta maior afinidade com a fase estacionária, com ponto isoeléctrico 4.7: o