proteinas

PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DO RIO GRANDE DO SUL
FACULDADE DE BIOCIÊNCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR
BIOQUÍMICA I

Prof. Maurício Bogo
Prof. Luiz A. Basso

DETERMINAÇÃO QUANTITATIVA DE PROTEÍNAS
MÉTODO DO BIURETO
Racional:
O método fotocolorimétrico foi desenvolvido com a finalidade de dosar substâncias biológicas. Neste método são utilizadas reações que resultam em soluções coloridas. A intensidade da cor produzida é proporcional à concentração da substância que está sendo dosada. Em conseqüência desta proporcionalidade, é possível dosar substâncias em soluções de concentração desconhecida (AMOSTRA), ao comparar a intensidade da cor produzida por esta substância à intensidade da cor produzida pela mesma substância em uma outra solução onde a concentração é previamente determinada (PADRÃO). A diferença de coloração é muitas vezes imperceptível a olho nu. A medida da intensidade de cor é efetuada por instrumentos denominados fotocolorímetros ou espectrofotômetros. Estes instrumentos possuem uma fonte de luz branca, filtros coloridos (fotocolorímetro), prismas ou retículos de difração (espectrofotômetro), através dos quais pode ser feita a seleção do comprimento de onda (), e um sistema onde a intensidade da luz é detectada, transformada em corrente elétrica, amplificada e medida. Ao incidir um feixe de luz sobre uma solução corada, verifica-se que a intensidade de luz que emerge da solução (I), é menor que a intensidade de luz incidente nesta solução (Io). A diferença entre a intensidade de luz de incide e a intensidade de luz que atravessa a solução corada pode ser medida e expressa pelo coeficiente obtido através da divisão da intensidade da luz emergente (I) pela intensidade da luz incidente (Io). Este coeficiente é chamado de transmitância (T). Por sua vez, mede-se a intensidade de luz absorvida por uma solução corada pela redução da medida da intensidade de luz transmitida. A medida de absorção é chamada de