Método de Elisa

DEFINIÇÃO
O ELISA é uma técnica de Imunoensaio enzimático (EIA) heterogêneo, muito utilizada para diagnostico principalmente por causa de seu baixo custo e por detectar quantidades extremamente pequenas de antígenos ou anticorpos. Esse exame se baseia na detecção de anticorpos ou de antígenos específicos, através da reação anticorpo-antígeno.

ELISA DIRETO
Técnica utilizada para a detecção de antígeno presente na amostra analisada, onde pega-se uma placa contendo anticorpos para a patologia a ser analisada e seguem-se as seguintes etapas:
Coloca-se o soro do paciente nos poços presentes na placa de microtitulação revestidos por anticorpos específicos. Se existir presença de antígenos, esses se ligarão aos anticorpos presentes na placa formando um complexo: anticorpo (ligado à placa) – antígeno;
Após esse processo é realizada uma lavagem da placa (essa lavagem é feita usando um tampão de lavagem), para retirar os antígenos não ligados;
Adiciona-se um segundo anticorpo para esse antígeno, assim formar-se á um complexo: anticorpo (ligado à placa) – antígeno – anticorpo;
Após um período de incubação, realiza-se outra lavagem da placa, para retirar os anticorpos que não formaram o complexo;
Adiciona-se depois um anti-anticorpo conjugado, assim se formará um complexo: anticorpo (ligado à placa) – antígeno – anticorpo – anti-anticorpo conjugado;
Realiza-se outra lavagem, para retirar o excesso de anti-anticorpo conjugado, não ligado ao complexo;
Nos casos em que o conjugado é uma enzima, adiciona-se um substrato para a enzima. O substrato adicionado, ao se ligar à enzima do complexo, forma um produto colorido;
Por fim adiciona-se uma solução de parada, ou seja, uma solução que interrompa a ação da enzima para que assim a solução não fique com uma coloração muito forte e atrapalhe a leitura do teste.

ELISA INDIRETO

Este teste caracteriza-se por uma