Incompleto

Procedimento Operacional Padrão - POP
Dosagem de Proteínas

1. Materiais Necessários

Tubos de Ensaio; Grade de tubos; Água Destilada; Estante para microtubos tipo Eppendorf (1,5 mL); Micropipetas com volume: * 1 – 5 mL; * 2 – 15 µL; * 20 – 200 µL; * 50 – 200 µL; * 100 – 1000 µL. Ponteiras; Descarte (material para lavagem); Cronômetro / Relógio; Espectrofotômetro + Cubeta (Plástico); Reativos: * Reativo A 30g Na2CO3 (Carbonato de Sódio)
+ 4g NaOH (Hidróxido de Sódio) qsp 1.000 mL de Água Destilada; * Reativo B
CuSO4 . 5H2O (Sulfato de Cobre Pentahidratado) a 2%; * Reativo C
KNaC4H4O6·4H2O (Tartarato de Sódio a 4%). Padrão de Albumina 20 mg/%; Folin-Ciocalteu 1N
5 mL de Folin-Ciocalteu 2N + 5 mL de Água Destilada.

2. Preparo da Bateria de Tubos

Para cada amostra identificar: * 3 tubos para o Homogenato do Fígado (HF); * 3 tubos para o Sangue Total (ST); * 3 tubos para o Homogenato do Cérebro (HC); * 3 tubos para o Padrão (Pd); * 1 tubo para o Branco (Bco).

3. Preparo das Diluições

Grade para tubos; Identificar 4 tubos: * 1 tubo para HF (1:300); * 1 tubo para ST (1:8); * 1 tubo para Plasma (1:500); * 1 tubo para HC (1:200).

Preparar diluições utilizando os tubos identicados acima: Homogenato do Fígado (1:300) 5µL + 1,495 mL de água destilada. Sangue Total (1:8) 200µL + 1,4 mL de água destilada. Plasma (1:500) 5µL + 2,495 mL de água destilada. Homogenato do Cérebro (1:200) 5µL + 0,995 mL de água destilada.

4. Preparo da Mistura Reativa (MR):

Para saber a quantidade necessária de Mistura Reativa utilize a fórmula:

Vn=QTb

Vn = Volume Necessário da MR (mL);
QTb = Soma da Quantidade de Tubos das Baterias (un).

Para preparar a Mistura Reativa utilize a proporção (é importante seguir a ordem de solubilização - BCA):

MR = 0,2 mL do Reativo B + 0,2 mL do Reativo C + 20 mL do