Identificação de glicogênio hepatico
Introdução:
Normalmente encontrado no fígado e nos músculos o glicogênio é a principal reserva energética das células. É um polímero de glicose e serve como armazenamento da mesma. No estado de jejum, quando não estamos ingerindo glicose, o fígado utiliza a glicose proveniente do glicogênio para a manutenção da glicemia no sangue. A principal função do glicogênio armazenado no fígado serve para alimentar a necessidade energética das células cerebrais.
Metodologia:
Foram colocados 250mg de tecido hepático (fígado de rato) em dois em dois tubos de ensaio, um contendo fígado em estado alimentado (tubo A) e o outro em estado de jejum (tubo B). Logo após foi pipetado 2,5mL de KOH 30% e os tubos foram aquecidos em banho-maria fervente durante 20 minutos. Ao tirar do banho-maria os tubos foram resfriados em água corrente. Do extrato obtido dos tubos A e B após o banho foram pipetados 0,5mL para dois outros tubos e foi adicionado 1mL de etanol 95%. O conteúdo foi misturado com bastão de vidro e aquecido durante dez minutos a 70 °C, logo após resfriado em gelo durante 15 minutos. Após estes procedimentos os dois tubos foram centrifugados 3.000 r.p.m por dez minutos.
Resultado:
O KOH foi responsável pela desnaturação das proteínas durante o banho-maria, liberando o glicogênio que foi precipitado pelo etanol.
No final da reação, quando os tubos foram tirados da centrifuga pudemos observar que o tubo A que continha o fígado em estado alimentado apresentava uma coloração mais clara do que o tubo B que continha o fígado em estado de jejum.