Genética

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X.1. BIOLOGIA MOLECULAR
X.1. TÉCNICAS DO DNA RECOMBINANTE
Engenharia Genética - É a manipulação direta de ácidos nucleicos (DNA, RNA) com o objetivo de transferir uma informação genética de um organismo a outro.

Conceitos Essenciais:
Plasmídio - DNA pequeno ( cerca de 3000 pares de bases) capaz de auto-replicação
(independente do hospedeiro), permite a inserção de fragmentos de DNA em regiões de sítios múltiplos de restrição (SCM) e possui resistência à antibióticos, além de outros marcadores fenotípicos como a β-galactosidase.

Lac Z ( β -galactosidase)

Sítio de C lonagem
M últipla (SC M )

R esistência à A ntibióticos

Lac Z

O ri (origem da replicação)

Sítio de Clonagem Múltipla: sítio específico para várias enzimas onde cada uma corta o plasmídio uma única vez.
Ori: origem da replicação - independente da bactéria.
Lac Z: genes que codifica para a β-galactosidade, enzima responsável pela quebra da galactose. Resistência à antibióticos: ex: AmpR (Resistência à Ampicilina).

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Enzimas de Restrição - proteínas capazes de cortar o DNA em sítios específicos de acordo com a sequência das bases (A, T, C, G). Exemplo:
Eco RI: Proveniente da E. coli

5’---------GAATTC----------3’
3’---------CTTAAG----------5’

As sequências são palindrômicas, isto é, a mesma sequência é lida no sentido inverso.
As enzimas só reconhecem o sítio de clivagem no sentido 5’

3’. No caso da enzima

acima, as extremidades produzidas pelo corte são chamadas adesivas ou coesivas.
Enquanto que enzimas que cortam exatamente na mesma base, são chamadas lisas ou abruptas, tal como:
5’------GGCC---------3’
3’------CCGG---------5’
As enzimas de restrição, sensíveis à metilação, podem não reconhecer algum sítio específico se uma das bases estiver metilada.

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X.2. ENGENHARIA GENÉTICA

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X.3. DIAGNÓSTICOS MOLECULARES
Amostra

Lise

Associar

Lavar

Eluir

DNA
Genômico ou
Viral

Termociclador (PCR)

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