Extração de DNA da banana/tomate
a) Por que é necessário esmagar/amassar a fruta?
b) Em que etapa do procedimento ocorre o rompimento das membranas das células da banana? Explique.
c) Qual a função do sal de cozinha?
d) Qual o papel do álcool?
e) Qual o papel do detergente?
f) Por que você não pode ver a dupla hélice do DNA extraído?
g) Considerando os procedimentos da extração do DNA genômico, você espera obtê-lo sem quebras mecânicas e/ou químicas?
V. EXTRAÇÃO DE DNA DA BANANA
Respostas para as questões:
a. é necessário esmagar ou amassar a fruta para que os produtos químicos usados na extração (detergente e sal) cheguem até as células.
b. No passo 3. Os agentes mais empregados para a lise ou solubilização das membranas são os detergentes. Diferentes detergentes extraem diferentes tipos e quantidades de lipídeos da membrana, juntamente com proteínas. Os detergentes solubilizam ou dispersam material insolúvel em água por meio da formação de agregados microscópicos (micelas).
c. O sal proporciona um ambiente favorável para o processo de extração, pois contribui com íons positivos (NA+) que neutralizam a carga negativa do DNA.
d. Papel do etanol - O DNA contido na fase aquosa está dissolvido em água. Na presença de concentrações relativamente altas de cátions monovalentes (Na+), o etanol induz uma mudança estrutural transitória na molécula dos ácidos nucléicos ocasionando sua agregação e precipitação. Em outras palavras, o DNA sai de solução e precipita. Como o DNA tem também menor densidade que os outros constituintes celulares, por isso surge na superfície da solução.
e. A estrutura de dupla hélice só pode ser visualizada de modo indireto e através de aparelhos sofisticados. O que você está observando são milhares de fitas de DNA juntas.
f. Como o DNA genômico é formado por moléculas muito longas (sendo que cada cromossomo é formado por uma única molécula de DNA) são geradas inúmeras quebras mecânicas nos procedimentos de