espectrofotometria

Matérias e reagentes utilizados:
Pipeta de vidro – 2 mL
Pera.
2 pipetas automáticas calibradas em 20 e 200 μL
Tubos de ensaio
Estante para tubos de ensaio
Banho-maria
Espectrofotômetro
Solução de Glucox.
Solução padrão de glicose (1mg/ml).
Inicialmente, pegaram-se 8 tubos de ensaio. Esses tubos foram enumerados e identificados: o primeiro tubo referiu-se ao Branco e o último à amostra, em que a Glicose Padrão foi substituída pelo D1.
Depois os reagentes foram adicionados, sendo o volume de Glicose Padrão + Água = 100 μL. Para adicionar o Glucox foi utilizada uma pipeta de vidro de 2 mL, a pipeta foi zerada a fim de diminuir a margem de erro e então se pipetou 0,9 mL do reagente dentro dos tubos. Após isso, com a pipeta automática, colocou-se a Glicose (com exceção do primeiro tubo, que é o branco, e do último, em que é colocado D1) e a água (exceto no tubo 7 em que é adicionado somente glicose).
Ao final, o volume dos reagentes foi o seguinte:
Tubo
Glucox
Glicose Padrão
Água
1
0,9 mL
0
100 μL
2
0,9 mL
10 μL
90 μL
3
0,9 mL
20 μL
80 μL
4
0,9 mL
40 μL
60 μL
5
0,9 mL
60 μL
40 μL
6
0,9 mL
80 μL
20 μL 7
0,9 mL
100 μL
0
8
0,9 mL
20 μL*
80 μL

* 20 μL de D1
Depois de adicionar os reagentes, os alunos colocaram os tubos no banho-maria por 10 minutos. Dado o tempo, os tubos foram retirados e pôde-se observar que a intensidade da coloração vermelha formada é diretamente proporcional à concentração de glicose, e a absorbância deste produto colorido pode ser medida pelo espectrofotômetro utilizando-se um comprimento de onda de 510 nm.
Em seguida, os tubos foram levados para o aparelho de leitura, o espectrofotômetro. A amostra do tubo 1, que continha o branco, foi transferida para uma cubeta e esta foi encaixada no interior do espectrofotômetro. Fechou-se a tampa do aparelho e o valor demonstrado foi zero. Em seguida, as amostras dos outros tubos foram também transferidas para cubeta e os resultados de absorbância foram