DINÂMICA CELULAR

2.4. Atividade tripanocida de Epóxi-a-Lap
Efeitos sobre formas tripomastigotas de T. cruzi
Inicialmente os tripomastigotas foram incubadas com diferentes concentrações de Epóxi-a-Lap e em seguida a concentração que proporcionou os melhores efeitos sem citotoxicidade foi selecionada para o uso em todos os ensaios de Epóxi-a-Lap. Em seguida, as formas vivas tripomastigotas do T. cruzi foram ajustadas a uma concentração de 2x10^6 células / ml em um meio de cultura de células com 10% de soro humano. Depois os parasitas vivos foram contados em intervalos de de 24, 48 e
72 h em uma câmara de Neubauer usando microscopia óptica. Cada experimento foi realizado em triplicata e os grupos de controle (formas tripomastigotas não tratados) foram realizada em presença de DMSO a 1%, uma vez que não demonstrou quaisquer efeitos sobre o parasitas ou células hospedeiras.
2.4.2. Efeitos sobre formas amastigotas de T. cruzi A atividade tripanocida de Epóxi-a-Lap em formas amastigotas foi avaliada em intervalos de 24, 48 e 72 horas , contando macrófagos humanos ou fibroblastos infectados e não-infectados.
As células não infectadas e o número de parasitas no interior das células também foram contadas por meio de microscopia óptica. Células infectadas por T. cruzi tratadas e não tratadas foram fixadas com metanol e coradas com o método
May-Grunwald-Giemsa antes da análise de microscopia de luz . Determinou-se o número de fibroblastos infectados ou macrófagos humanos através da observação de pelo menos 100 células selecionadas aleatoriamente em uma ampliação de 1000 vezes, usando um microscópio . Todas as experiências foram realizadas pelo menos três vezes. . A incubação do epóxi-a-Lap com macrófagos não induziu qualquer alteração morfológica detectável com ou sem os parasitas . O efeito tripanocida está representada neste trabalho como a diferença entre o índice de endocitose de células não-tratadas e de células tratadas com o derivadado. O índice de