Cromatografia

UNIVERSIDADE LUTERANA DO BRASIL
CURSO DE FARMÁCIA
BIOQUÍMICA GERAL I

CROMATOGRAFIA DE AMINOÁCIDOS

INTRODUÇÃO A cromatografia é um processo de separação de componentes de uma mistura complexa. No caso de cromatografia em camada delgada, os aminoácidos são separados conforme a solubilidade ao solvente. O solvente utilizado para a separação de aminoácidos é composto por uma mistura de água, butanol, acetona e ácido acético. Os componentes mais polares do solvente (ex: água) ficam retidos firmemente à sílica presente na cromatofolha que é muito hidrofílica. Forma-se, assim, a fase estacionária. Os componentes mais apolares do solvente formam a fase móvel. Os aminoácidos com cadeias apolares grandes (Leu, Ile, Phe, Val, Met) migram mais rápido. Já os aminoácidos com cadeias laterais apolares curtas (Pro, Ala, Gly) ou com cadeias laterais polares (Thr, Glu, Ser, Arg, Asp, His, Lys, Cys) apresentam uma migração mais lenta, distanciando-se menos do ponto de aplicação da mistura. Na fase móvel, a proporção de solvente polar e apolar varia gradualmente ao longo do papel. A razão entre a distância percorrida por um aminoácido e a distância percorrida pela frente do solvente, ambas medidas a partir do ponto de aplicação da amostra, denomina-se Rf (mobilidade relativa).

TÉCNICA

Parte 1
1. Marcar na cromatofolha (silica gel 60, Merck 5553) (tamanho 5 x 10) 4 pontos à lápis, situando-os da seguinte forma: 1,5 cm acima da margem inferior, 1,5 cm das margens laterais e 1,0 cm do ponto vizinho.
2. Em cada um dos pontos marcados, utilizando capilar de vidro, aplicar uma pequena gota das seguintes soluções: 1) mistura de aminoácidos, 2) padrão do aminoácido leucina, 3) padrão do aminoácido alanina e 4) padrão do aminoácido glicina. Secar em seguida com o secador.

Parte 2 3. Colocar a cromatofolha dentro de um recipiente com solvente, composto por butanol, acetona, ácido acético e água, na proporção 7:7:1:5. Tampar o becker com plástico fino. O solvente