CROMATOGRAFIA HPLC

Técnicas em Biofísica Celular

PROFESSOR: CHARLES F. FERREIRA

Acadêmicos: Eduarda Mattos, Fernanda P. Fraga , Iasmyn, Juliano Bueno, Marcos Paulo e Tassiana.

CROMATOGRAFIA

Histórico
• Origem no termo grego chroma (cor) + graphein (escrever);
• Ganhou importância como método de separação por volta de 1903;

• Com o botânico russo Mikhail Semenovich Tswett, que descrever suas experiências na separação dos componentes de extratos de folhas.

CROMATOGRAFIA
• Baseia-se na migração de componentes de uma mistura entre duas fases:  Fase estacionária: retém elementos
 Fase móvel: conduz a mistura por meio de um soluto através da

fase estacionária
• Principio geral:

“Movimentar o sistema em condições apropriadas, e separar espacialmente os componentes: a cada componente, uma posição no trajeto”

TIPOS DE CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA EM COLUNA
• Mais antigo procedimento cromatográfico (citado por Tswett);
• Consiste em uma coluna de vidro, metal ou plástico;
• Preenchida com um adsorvente adequado;
• Principais adsorventes: sílica gel, a alumina, o carbonato de cálcio, o óxido de magnésio, o carvão ativado, a sacarose e o amido, entre outros;
• A substância é colocada na coluna pela parte superior e o eluente é vertido após, em quantidade suficiente para promover a separação.

Amostra cromatografada com cor: visualiza-se as zonas coloridas descendo pela coluna, que são recolhidas, separadamente, pela extremidade inferior.

Amostra sem cor: são feitas revelações (luz UV, reveladores químicos, etc.), recolhem-se várias frações iguais de eluente;

CROMATOGRAFIA LÍQUIDA (CL)
• Fase móvel: líquido de baixa viscosidade;
• Divide-se em: cromatografia líquida de alta precisão (HPLC),

cromatografia de permuta iônica (IEC), cromatografia de exclusão molecular (SEC);
• Existem diferentes detectores (selecionados de acordo com a mistura a ser separada);
• Detector seletivo: responde diferentemente à estruturas moleculares

diferenciadas da amostra, (Absorbância e