Controle de qualidade na amplifica￧￣o, detec￧￣o e laudo em análise de biologia molecular

1 – OBJETIVO

Estabelecer os procedimentos de controle de qualidade para realizar a amplificação, detecção e laudo de análise de biologia molecular. 2 – PRINCÍPIO DO TESTE

A etapa de amplificação é uma fase crítica na análise de biologia molecular. Devem ser observados vários aspectos, como contaminantes, volume de amostras, reagentes, etc. A fase de detecção necessita de vários cuidados como o preparo dos géis e corantes utilizados. Já a confecção dos laudos é uma parte muito importante de todo o processo, pois nele devem constar todos os dados e informações do teste realizado. A seguir serão demonstrados os critérios que devem ser observados em cada uma destas etapas na técnica de PCR in house.

3 – APLICAÇÃO CLÍNICA

Cuidados que devem ser tomados na técnica de PCR in house.

4 - PROCEDIMENTO

4.1 Amplificação

- As áreas de pré-amplificação e pós-amplificação devem ter separação física adequada para evitar a contaminação por amplicons.
- Sempre utilizar ponteiras estéreis e com barreira.
- Reagentes e insumos devem ser controlados quanto ao lote e validade.
- Utilizar EPIs, como luvas, toucas e propés descartáveis para evitar o fenômeno de "carryover".
- Pipetas devem sempre ser limpas e descontaminadas diariamente e sua calibração deve ser feita a cada 3-6 meses.
- Devem ser usados controles positivos (baixo e alto), negativos e controles de reação.
- As amostras devem ser ordenadas da seguinte forma: amostra de paciente, controles positivos e controles negativos.
- Deve se dar atenção especial às temperaturas e tempos utilizados para a reação.

4.2 Detecção

- Os géis devem ser preparados cuidadosamente, dando-se atenção para a concentração, quantidade de água, qualidade da água, temperatura de dissolução e corante utilizado.
- A tensão e tempo utilizados na fonte ligada a cuba de eletroforese devem ser cuidados.
- A quantidade e concentração de TBE também devem ser cuidadas.
- Sempre deve ser utilizado marcador de peso