Coloração de zielh neelsen para tuberculose bovina

Optimização da coloração de Zielh Neelsen para Tuberculose Bovina.

A Tuberculose Bovina é uma doença causada pelo Mycobacterium bovis. Normalmente é caracterizada pela formação de granulomas nodulares de consistencia caseosa, caseo-calcária ou calcificada, designados tubérculos. O diagnóstico presuntivo é feito em amostras de tecido fixado em formol e corado por hematoxilina-eosina, que apresentam as lesões histológicas caracteristicas (necrose caseosa, mineralização, células epitelióides, células gigantes multinucleadas e macrófagos). A coloração de Zielh Neelsen é usada como coloração complementar de diagnóstico, uma vez de a Mycobacterium bovis é uma bactéria álcool-ácido resistênte. O protocolo de coloração de Zielh Neelsen, utilizado pela optica, não se tem mostrado eficaz na detecção da Mycobactérium bovis, motivando assim a sua optimização.

Técnica

As micobactérias tem a cáapsula de constituição lípidica, que as torna hidrofóbicas. Esta cápsula influencia a penetração e resistência à remoção de corantes álcool-ácidos. A carbofucsina (soluto de fucsina de Zielh) ultrapassa a cápsula lipídica e cora-as de vermelho. A solução álcool-ácido não remove este corante, como nas restantes bactérias que não tem cápsula lipídica.

Objectivo

Optimizar a marcação de Mycobacterium bovis em cortes para diagnóstico de tuberculose bovina.

Hipóteses

1- Cápsula lipídica destruída pelo xilol na desparafinação. 2- Cápsula lipídica impermeável ou permeável ???? à carbofucsina. / Aplicação de fonte de calor na permeabilização da cápsula lipídica á carbofucsina

Reagentes

Xilol; Etanol 70º; Etanol 96º; Etanol 100º; Ácido-álcool 1%; Soluto de Carbo-Fucsina de Ziehl Neelsen; Solução de Azul de Metileno; Solução de Verde Luz; e Entelan.

Ensaios de optimização

1º Ensaio: Protocolo Optica (anexo I), ensaio de controlo.

2º Ensaio: Hipotese 1 (Cápsula lipídica