Clonagem e Expressão de Interferon Beta em E.coli

SHAPE MERGEFORMAT AGRADECIMENTOS A Deus pela presena constante em meu caminhos A Profa. Dra. Renata Castiglioni Pascon, pela amizade, orientao e dedicao. Agradeo de todo corao A Vanda, Patrcia, Monique e Ceclia, que muito fizeram por mim. Que eu possa retribuir pela ajuda de sempre A minha amiga Nolia, pela confiana, preocupao e ajuda de sempre Aos meus tios Lucinda e Vanderlei, por me estenderem a mo Aos meus amigos de trabalho Eric, Leandro e Thiago. SUMRIO RESUMO A esclerose mltipla uma doena desmielinizante do sistema nervoso central que afeta principalmente indivduos jovens, entre 20 e 40 anos. No Brasil calcula-se 10 portadores para cada 100.000 habitantes ou ainda 35.000 portadores de esclerose mltipla em todo o pas. No se tem causa conhecida, acredita-se que esteja relacionada a um fator ambiental associado a um fator hereditrio, provavelmente uma infeco no tratada. Assim como no h causa conhecida, tambm no h cura conhecida, o que se tem hoje so tratamentos de regime teraputico especficos da doena como imunossupressores ou imunomoduladores, e tratamentos sintomticos que minimizem ou aceleram na recuperao quanto aos sintomas causados pela doena. Como a principal forma de tratamento da doena, tem sido amplamente usado o Interferon-Beta, sua capacidade est no poder antiinflamatrio e antiviral que ajuda contra a evoluo da doena. Os Interferons so protenas naturais que pertencem famlia das citocinas e possuem pesos moleculares de 15.000 a 18.000 Daltons. Este trabalho visa construo, atravs da tecnologia do DNA recombinante, de um clone de Escherichia coli que expressa uma verso modificada de Interferon-Beta 1b (Cys17-Ser17) que atua da mesma forma que o Interferon-Beta produzido pelo organismo. Atravs dos mtodos de PCR de fuso e de Biologia Molecular obteve-se um clone de aproximadamente 4 kb e uma protena entre 15.000 a