Bioquímica

AULA DE REVISÃO
Prova Prática – Bioquímica Estrutural

Caio Ribeiro, 2013

• Cromatografia de Aminoácidos
• Reatividade e Solubilidade de
Lipídeos
• Dosagem de Proteínas
• Cinética da Invertase

• Eletroforese de Proteínas

Aminoácidos - Apolares

Aminoácidos - Apolares

Cromatografia
Método físico-químico de separação dos componentes de uma mistura, realizada pela distribuição destes compostos entre duas fases, em contato íntimo.

Cromatografia em Camada Delgada
Envolve o movimento, por capilaridade, de uma fase líquida (geralmente um solvente orgânico ou uma mistura de solventes) por uma camada delgada e uniforme de uma fase estacionária (usualmente sílica gel – SiO2) aderida a um suporte rígido ou semirrígido que pode ser vidro, alumínio ou plástico.

Cromatografia em Camada Delgada
Aplicação: acompanhamento de reações orgânicas, para a purificação de substâncias e para a identificação de frações coletadas em cromatografia líquida clássica, determinar a pureza do composto, identificar componentes em uma mistura comparando--‐os com padrões; acompanhar o curso de uma reação pelo aparecimento dos produtos e desaparecimento dos reagentes e ainda para isolar componentes puros de uma mistura.

Vantagens: técnica simples, barata, rápida, permite análises em batelada, baixo gasto de amostra, e importante análise qualitativa e quantitativa quando associada a outros métodos.
Desvantagens: condições variadas influenciam o valor do Rf, alta resolução depende de fatores, como maior tempo de corrida, maior tamanho da placa, etc, difícil automação, dificuldade em padronizar as fases móveis, prévia saturação da cuba, variações entre os lotes das placas,

PREPARO DAS PLACAS
• 1) Cortar a placa de cromatografia no tamanho adequado
Dar espaço adequado para aplicação das amostras sem interferir no espaço da outra amostra
• 2) Deixar em overnight a placa na estufa a 110°C

Evaporação da água ligada à fase estacionária. Menor interação entre moléculas da amostra e da fase