bioquímica

Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”
Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias
Medicina Veterinária

Relatório da Aula Prática de Bioquímica Animal
DOSAGEM DE GLICOSE PELO MÉTODO ENZIMÁTICO (GLICOSE OXIDASE)

Jaboticabal, 2013

1. Objetivo
Ao adicionar-se glicose a uma solução de tampão fosfato pH 7,4 contendo as enzimas Glicose Oxidase (GOD) e Peroxidase (POD) e os compostos 4-Aminoantipirina (4-AAP) e p-Hidroxibenzoato, ocorrem as seguintes reações: GOD
GLICOSE + O2 + H2O Ácido Glucônico + H2O2

POD
2 H2O2 + 4-AAP + p-Hidroxibenzoato 4-Antipirilquinonimina + 4 H2O

O composto 4-Antipirilquinonimina é o produto da oxidação da 4-Aminoantipirina e possui coloração avermelhada e a intensidade da cor produzida é diretamente proporcional à concentração de glicose presente na solução. A intensidade da cor avermelhada é medida em um espectrofotômetro ou fotocolorímetro, em um comprimento de onda de 510nm ou com filtro verde.

2. Material e Métodos I - Soluções padrão de glicose
Solução estoque: 5,0 g de glicose e completar até 500 mL com ácido benzóico 0,25% (5000 mg de glicose/500 mL; 1000 mg/dL; 10 mg/mL; 10 µg/µL ) – Balão volumétrico
Preparar antes 500 mL de ácido benzoico a 0,25% (P/V)
Padrão 8 (800 mg/dL): 80 mL da solução estoque e completar para 100 mLcom ácido benzóico 0,25% – Balão volumétrico
Padrão 7 (600 mg/dL): 60 mL da solução estoque e completar para 100 mL com ácido benzóico 0,25% – Balão volumétrico
Padrão 6 (500 mg/dL): 50 mL da solução estoque e completar para 100 mL com ácido benzóico 0,25% – Balão volumétrico
Padrão 5 (400 mg/dL): 40 mL da solução estoque e completar para 100 mL com ácido benzóico 0,25% – Balão volumétrico
Padrão 4 (300 mg/dL):30 mL da solução estoque e completar para 100 mL com ácido benzóico 0,25% – Balão