Bioquimica

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Capsaicine, um componente da pimenta vermelha, estimula a actividade da proteína Cinase CKII

Yun-Wha Rho & Young-Seuk Bae*
School of Life Sciences and Biotechnology, College of Natural Sciences, Kyungpook National University, Daegu 702-701, Korea

Introdução:
A proteína CKII é uma haloenzima composta por duas subunidades α cataliticas e duas subunidades β reguladoras, esta enzima cataliza a fosforilação de um grande número de proteínas do citoplasma e do núcleo das células eucarioticas.
A Capsaicine é o ingrediente picante da pimenta vermelha este induz a apoptose de células tumorais, previne o cancro do pâncreas, uma vez que forma espécies reactivas com o oxigénio e provoca a disrupção da membrana da mitocondrêa
Estudos já feitos mostram que a heparina estimula a subunidade reguladora desta proteína. Este trabalho tem como objectivo principal verificar se a Capsaicine inibe a actividade da enzima CKII

Fig. 1. Estrutura Capsaicina

Resultados:
Materiais e Métodos:
• Cultura celular e purificação do CKII:
Colocar as células no meio de cultura DMEM enriquecido com um suplemento de 10% de soro de bovino, encubar a 37ºC com 5% de dióxido de carbono
As haloenzimas humanas CKII e CKIIα são extraídas e purificadas em E.coli

• Preparação do extracto de células:
Wetern blotting: Tratar as células com Capsaicine 0,3mM, lavar com solução salina de fosfato gelado e lisar as células com 100μL de ice cold ripa buffer
Para o ensaio da actividade do CKII: Lisar as células com tampão de lise por ultrasons, remover os resíduos celulares por centrifugação e ajustar os volumes de sobrenadante para calcular a concentração de proteína

• Ensaio para a actividade CKII:
O teste padrão para a actividade de fosfotransferase CKII foi realizado numa mistura contendo 20mM tris –HCl, num pH 7,5; 120mM Kcl, 10mM Mgcl2, 100mM e [y32P] GTP na presença de um substrato de peptideo sintético mM (RRREEETEEE) ou defosforilação β- caseína em volume total de