biomol

SEQUENCIAMENTO DE GENOMA E MEDICINA PERSONALISADA; BIOLOGIA MOLECULAR NO
DIAGNÓSTICO DE DOENÇAS; TÉCNICAS DE ESTUDO DE TRANSCRIPTOMA E PROTEOMA
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1. De maneira geral, quais são etapas envolvidas no sequenciamento de um genoma?
- Preparação dos clones
Fragmentação enzimática
Ligação a um vetor
Screening dos clones de interesse (com sondas de DNA ou com anticorpos)
- Sequenciamentos dos clones
- Montagem e análise do genoma.

2. Compare as bibliotecas genômicas e de cDNA quanto ao material de origem e ao preparo das mesmas. Biblioteca Genômica
Obtido a partir de DNA gnômico fragmentado de qualquer tecido
A frequência de clones independe do nível de expressão Pode conter promotores e íntrons
Não pode ser utilizado para expressão heteróloga em bactérias
Utilizado para sequenciamentos de genomas, mapeamento, estudo de sequencias regulatórias, etc.

Biblioteca cDNA
Obtido a partir da transcrição reversa de mRNA em um tecido especifico
A frequência de clones depende da expressão de mRNA no tecido utilizado
Não contem promotores e íntrons
Pode ser utilizado para expressão em bactérias se o vetor tiver promotor e outros sinais adequados
Utilizada para sequenciamento de sequências expressas (ESTs), estudos de função do gene, expressão de proteínas em bactérias

3. Os vetores BAC e YAC são úteis no preparo de bibliotecas genômicas.
a. Qual a vantagem de utilizar estes vetores, quando comparados aos plasmídeos?
Vantagens para construção de bibliotecas genômicas com insertos de grandes tamanhos, possuem vários componentes de replicação e de controle de números de copias estão presentes, possuem marcadores de sítios de clonagem em diferentes lugares.

b. É possível sequenciar diretamente os fragmentos de DNA incorporados em um BAC? Explique.
Não. O sequenciamento não ocorre nos fragmentos grandes incorporados ao BAC. Em um primeiro momento cria-se essa