Biomol

Materiais utilizados

* Padrão de peso molecular Amilina aproximada mente 20 kDA 10 µL * Soro fetal bovino 1:10 10 µL + 10 µL TA (tampão da amostra) * Soro fetal bovino 1:20 10 µL + 10 µL TA * Amostra de lisado de bactéria não-induzida (NI) 10 µL + 10 µL TA * Amostra de lisado de bactéria induzida (I) 10 µL + 10 µL TA * Amilina (aproximadamente 20kDA) * Becker * Erlenmeyer * Eppendorfs * Pipetas * Pipetador * Suporte de preparo de gel * Placa de vidro para gel * Cuba de eletroforese * Fonte de tensão elétrica * Papel para absorver * Aparelho de banho-maria (banho fervente) * SDS-p (corante da amostra * Gel separador (10ml):

Água bidestilada | 4 ml | Mistura 30% acrilamida/0,8% bisacrilamida | 3,3 ml | Tampão (4x concentrado) 1,5 M Tris-Cl pH 8,8 | 2,5 ml | 10% SDS | 0,1 ml | 10% persulfato de amônio | 0,1 ml | Catalizador TEMED | 0,004 (4 µL) | * Gel concentrador (3ml):

Água bidestilada | 2,1 ml | Mistura 30% acrilamida/0,8% bisacrilamida | 0,5 ml | Tampão (4x concentrado) 1,5 M Tris-Cl pH 6,8 | 0,38 ml | 10% SDS | 0,03 ml ( 30 µL) | 10% persulfato de amônio | 0,03 ml ( 30 µL) | Catalizador TEMED | 0,003 ml ( 3 µL) |

* Tampão de corrida * Butanol * Tampão da amostra SDS-p (corante) * Gelo * Suporte para tubo

Procedimento

As amostras, acondicionadas em eppendorfs, foram deixadas no suporte, aguardando o momento de uso.
Para fazer 10 ml de gel separador, em um becker foi colocado, com a ajuda de uma pipeta de vidro de 5ml num pipetador, 4ml de água bidestilada presente em um erlenmeyer. Com a mesma pipeta, foi adicionado 3,3 ml de mistura 30% acrilamida/0,8% bisacrilamida. Em seguida, com uma pipeta de 100-1000 µL, 2,5 ml do tampão (4x concentrado) 1,5 M Tris-Cl pH 8,8. Foi colocado também, com a pipeta de 100 a 1000 µL, 0,1 ml de SDS 10%. Ainda no becker, foi adicionado com uma pipeta de 0,5 a 10 µL, 0,1 ml de persulfato de