biologia

As principais técnicas moleculares utilizadas na identificação de DNA.

• Eletroforese

A eletroforese é uma técnica na qual é feita a separação das moléculas do material genético em função da sua massa (tamanho), forma e compactação. É uma técnica rápida, sensível e precisa.

O procedimento da eletroforese consiste na migração da molécula em questão em suportes (géis) por ação de uma corrente elétrica, com diferentes velocidades, dependendo do seu tamanho e forma. Quando submetidas a um campo elétrico, as moléculas migram para o polo positivo, pois são carregadas negativamente, e como força oposta à migração existe o atrito com o suporte (gel).

Moléculas maiores promovem maiores atritos com o gel e, portanto, apresentam uma migração mais lenta. A visualização da migração é realizada por meio da revelação do gel na presença de compostos intercalantes, como o brometo de etídio.

PCR
É um método usado na multiplicação da fita de DNA. São utilizados tubos de ensaio contendo o DNA, e outras componentes, como os primers(DNAs iniciadores) e a enzima DNA polimerase(enzima responsável pela replicação do DNA).

Primers: São fitas de DNA, com aproximadamente 20 bases ( A,T,C,G) complementares, ou seja, elas se ligam ao inicio da sequencia de DNA, que se deseja multiplicar. Quando uma molécula de DNA vai ser multiplicada deve-se separar a dupla fita, formando assim duas fitas diferentes mas complementares entre si. Cada fita servirá de molde para a duplicação, por isso, precisamos de dois tipos de primers diferentes.

Tecnica de PCR

1. A amostra de DNA, a enzima que faz a replicação (DNA polimerase), os nucleotídeos de DNA e os primers complementares a sequência de DNA são colocados em um tubo de ensaio. 2. Coloca-se o tubo de ensaio em uma máquina de PCR (máquina que aumenta e diminui a temperatura de acordo com um programa). Os passos seguintes, de aquecimento e resfriamento, acontecem dentro da máquina controlados pelo programa. 3.