biologia

Para começar a realização da amplificação de uma sequência de DNA primeiro foi preparado um master mix com um tampão da Taq 10x para que a Taq polimerase permanecesse estável; MgCl2 25mM; dNTPs 10mM que é uma mistura das quatro bases nitrogenadas que servirá para formar a fita complementar do DNA; os primers que se ligam na fita simples do DNA para que então a Taq polimerase se ligue neles para sintetizar a fita complementar com as dNTPs; a Taq polimerase que será a responsável pela polimerização da fita complementar do DNA e H20. O DNA molde não é colocado junto com o master mix, ele é acrescentado posteriormente.
O master mix foi feito com a quantidade para fazer quatro amostras, apesar de usarmos somente três amostras, pois com essa quantidade a mais evita problemas como faltar a quantidade se errar a pipetagem por exemplo. Depois de feita a pipetagem das três amostras e acrescentado o DNA molde as amostras foram colocadas na centrífuga para misturar bem o conteúdo e tirar qualquer resquício da amostra da parede do eppendorf. Depois da centrífuga as três amostras foram colocadas no termociclador.
No termociclador na primeira etapa do ciclo a temperatura foi elevada a aproximadamente 96°C para que ocorra a separação da cadeia de dupla hélice de DNA através da desnaturação, ocorrendo a quebra das pontes de hidrogênio. Na segunda etapa a temperatura foi resfriada para cerca de 60 °C para que os primers se emparelhassem com a fita molde simples de DNA. Na terceira e última etapa do ciclo a temperatura foi elevada a 72 °C para que haja a polimerização da nova fita do DNA a partir do DNA molde. Depois disso esse ciclo com essas três etapas foi repetido por volta de 30 vezes. O número de sequências de DNA é aumentado exponencialmente a cada ciclo, e no final dos 30 ciclos pode-se alcançar mais de um bilhão de cópias.
Para analisar o resultado foi utilizada uma técnica conhecida como eletroforese. Para a realização dela foi utilizado um gel de agarose que foi