bilirrubina

BILIRRUBINA
INTRODUÇÃO
A bilirrubina é o produto final da degradação da hemoglobina. Como esse processo ocorre nas células hepáticas, níveis alterados de bilirrubina indicam alterações hepatocelulares, obstrução biliar ou icterícia hemolítica.
OBJETIVO
Método para determinação da Bilirrubina Direta e Total. Teste Colorimétrico, somente para uso diagnóstico in vitro.

MATERIAIS
Soro livre de hemólise.
Espectrofotômetro
Pipetas
Tubos de ensaio
Kit Bilirrubina
Cronometro

PROCEDIMENTO

PREPARAÇÃO DIAZO REAGENTE
1) Adicionar 10 uL de nitrito de sódio nº 3
2) Adicionar 300 uL de Ácido Sulfanílico nº2
3) Homogeneizar bem em um tubo.

PREPARAÇÃO DO PADRÃO
1) Rotular em dois tubos de ensaio “B” (Branco) e “P” ( Padrão);
2) Adicionar 2 mL de Solução Acelerador ( nº 1) em cada tubo de ensaio. (Branco e Padrão);
3) Adicionar 200 uL do Ácido Sulfanílico no tubo de ensaio “B” (Branco);
4) Adicionar 200 uL do Diazo Reagente no tubo de ensaio “P” (Padrão);
5) Adicionar 100 uL de Solução Padrão em cada tudo de ensaio. (Branco e Padrão);
6) Homogeneizar por agitação, esperar 5 minutos e ler as absorbâncias em 525 nm, ajustando o zero com branco;

PREPARAÇÃO DA AMOSTRA
1) Rotular em três tubos de ensaio como “B” (Branco), “BD” ( Bilirrubina Direta) e “BT” (Bilirrubina Total);
2) Adicionar 100 uL da amostra (soro) em cada tubo de ensaio (branco, bilirrubina direta e bilirrubina total);
3) Adicionar 200 uL de Diazo Reagente nos tubos de ensaio de “BD” e “BT” ( bilirrubina direta e total);
4) Adicionar 200 uL de Ácido Sulfanílico no tubo de ensaio de “B” (branco);
5) Adicionar 2 mL de Solução Acelerador (n º 1) no tubo de ensaio de “BT” (bilirrubina total)
6) Adicionar 2 mL de Água Destilada nos tubos de ensaio de “B” e “ BT” (branco e bilirrubina direta);
7) Homogeneizar por agitação e esperar 5 minutos e ler as absorbâncias das Bilirrubina Direta e Total em 525 nm, ajustando o zero com o branco . A cor permanece estável por 30 minutos.