Auto Montagem Da Prote Na Do Capsideo De V Rus

AUTO MONTAGEM DA PROTEÍNA DO
CAPSÍDEO DE VÍRUS EM MOLÉCULAS
DE RNA DE DIFERENTES TAMANHOS:
EXIGÊNCIA DE UMA ELEVADA MASSA
DE PROTEÍNA ESPECÍFICA EM
RELAÇÃO A MASSA DE RNA
Amanda Letícia da Silveira
Bruna Canabarro Pozzebon
Mara Elisa Soares de Oliveira
Marina Guimarães Pacífico
Yasmim Freitas

INTRODUÇÃO
 Partículas

semelhantes a vírus podem ser formadas por auto montagem (VLPs) de proteínas do capsídeo a partir de moléculas de RNAs de comprimento crescente; INTRODUÇÃO
Vírus do moteado clorótico do caupi (CCMV):
 RNA1 e RNA2: replicação viral;
 RNA3: proteína de movimento e capsídeo;


RNA1: 3,171 nt
 RNA2: 2,774 nt
 RNA 3: 2,173 nt


OBJETIVO


Examinar a auto montagem da CP do vírus do moteado clorótico do caupi com moléculas de RNA que variam de 140 a
12.000 nts.

MATERIAL E MÉTODOS


Foram utilizados plasmídeos para clonagem de RNA;



Combinação RNA B1 e B3 por subclonagem direcional; 

Amplificação dos moldes de DNA pra transcrição de RNAs curtos; (Influência do
DNA no capeamento)

MATERIAL E MÉTODOS


Transcrição do RNA; (linearizou pra produzir um RNA transcrito).



Purificação da proteína do capsídeo do
CCMV; (Retira o vírus da planta e realiza a extração e posteriormente verifica a concentração de proteína).



Montagem in vitro: Titulações preliminares e revelação em gel. (Estudou a montagem do vírus com diferentes concentrações de RNA).

MATERIAL E MÉTODOS


Montagem in vitro de VLPs. Colocou a concentração de RNA e misturou numa proporção de 6:1. Analisou as partículas e realizou coloração negativa.



Combinação de RNAs
B1+B3:
clonou, transcreveu in vitro e colocou em concentrações diferentes, para ver a concentração do RNA X
Proteína e vice versa (influência na capsidação viral). MATERIAL E MÉTODOS


Microscopia eletrônica de transmissão de VLP:
Coloração negativa para comparar as partículas produzidas com a do vírus;

RESULTADOS

RESULTADOS

RESULTADOS

RESULTADOS

FIG 4 (A) Average capsid diameter as a function of