AULA ESPECTROFOTOMETRIA

Departamento de Bioquímica - UFRN
DBQ- 0033 Análises Bioquímicas

Espectrofotometria

Prof. Matheus Augusto de Bittencourt Pasquali
2015/01

Espectrofotometria
• É a medida da intensidade da luz em comprimentos de ondas selecionados. Espectrofotometria
• Relação entre TRANSMITÂNCIA E ABSOVÂNCIA
I0 < Is

T = Is/I0
Compostos em solução

I0 parâmetro IR

T = Is/IR

A = - log Is/IR

Espectrofotometria
• Relação entre TRANSMITÂNCIA E ABSORVÂNCIA

Relação

Espectrofotometria
• LEI DE BEER
Estabelece que a concentração de uma substância é diretamente proporcional à quantidade de luz absorvida ou inversamente proporcional ao logaritmo da luz transmitida. A= abc
A= Absorvância a= Constante de proporcionalidade definida como absortividade b= Trajetória da luz c= Concentração do composto absorvido

Espectrofotometria
OBS:
• Os valores de absorvância(A) não têm unidades
• Então as unidades para a são as recíprocas daquelas para b e c.
• Quando b = 1cm e c é expresso em moles por litros = substituído pela constante a

ε

ε (épsilon) é

O valor de é constante para um determinado composto, em um determinado comprimento de onda, sob condições prescritas do solvente, pH, temperatura, etc..; e então é denominado de

ABSORTIVIDADE MOLAR

Espectrofotometria
• A lei de Beer é seguida apenas se as seguintes condições estiverem reunidas: 1. A radiação incidente sobre a substância de interesse é monocromática
2. A absorção pelo solvente é insignificante, quando comparada com a absorvância do soluto
3. A concentração do soluto está dentro dos limites
4. Interferência óptica não está presente
5. Não ocorre reação química entre a molécula de interesse e outra molécula do soluto ou solvente

Espectrofotometria

Espectrofotometria
• Componentes básicos de um espectrofotômetro
•
•
•
•
•
•
•
•

Fonte de luz
Meio para isolar a luz (filtros, prismas e grades de difração)
Fibras ópticas
Cubetas
Fotodetector
Dispositivo de leitura
Registrador
Computador

Espectrofotometria
• Exercício