AP1 MedVet 2015 MicroVet

Roteiro de aula prática: Microbiologia Veterinária – Medicina Veterinária – 2015
COLORAÇÃO DE GRAM (Staphylococcus aureus e Escherichia coli), IDENTIFICAÇÃO E ISOLAMENTO DE S. aureus E PROVA BIOQUÍMICA PARA CATALASE (S. aureus e Streptococcus sp.)

1. Coloração de Gram:
Objetivos:
a) Corar uma lâmina pelo método de Gram;
b) Reconhecer bactérias Gram positivas e Gram negativas ao microscópio;
c) Compreender a importância dessa coloração para microbiologia clínica;
d) Compreender cada etapa do processo de coloração, bem como a função de cada substância utilizada.
A técnica de coloração de Gram foi descoberta pelo físico dinamarquês Christian GRAM, em 1884. A Coloração de Gram é muito utilizada na bacteriologia permitindo a distinção entre bactérias Gram positivas (púrpura) e Gram negativas (rosa). A diferença entre os dois tipos de células relaciona-se com a estrutura da parede celular das bactérias. A parede celular das bactérias Gram positivas é formada por uma camada espessa de peptideoglicano, enquanto que a parede celular das Gram negativas é formada por uma camada fina de peptideoglicano, rodeada por uma camada externa de lipopolissacarídeo e proteínas. Diferenças na permeabilidade dessas membranas aos reagentes químicos levam a diferenças no padrão de coloração. Embora a grande maioria das bactérias possa ser corada por tal método, algumas não o fazem satisfatoriamente, exigindo técnicas especiais de coloração.
Material
a) Cultura pura de Staphylococcus aureus e de Escherichia coli
b) Lâminas para preparação do esfregaço
c) Solução salina
d) Alça
e) Bico de Bunsen
f) Corantes para o Gram
Preparação do esfregaço
a) Limpar uma lâmina de vidro
b) Colocar uma gota de água destilada sobre a lâmina e com uma alça de inoculação, colher uma pequena quantidade de crescimento bacteriano da superfície do ágar e suspendê-la na gota de água destilada, espalhando suficientemente para obter um esfregaço fino
c) Deixar a lâmina secar à temperatura ambiente
d) Fixar na chama