Abdah

01)Qual a importância da técnica de sequenciamento de DNA? Como ela é realizada?
R: O sequenciamento do DNA é a identificação perfeita dos pares de bases (adenina, timina, citosina e guanina) em um segmento de DNA. O conhecimento da sequência de bases de um gene favorece importantes informações sobre sua estrutura, função e relação evolutiva com outros gênes (de um mesmo organismo ou de organismos diferentes) permitindo a avaliação direta de polimorfismo de DNA, fornecendo o melhor tipo de dados para interferências filogenéticas e determinação de relações de parentesco. Um dos métodos mais utilizados é o método didcoxi, conhecido também como terminadores de cadeia ou Sanger, onde há a síntese de enzimas de uma fita complementar , cujo crescimento é interrompido pela adição de um didcoxinucleotideo na extremidade de alongamento da cadeia. Os produtos da reação são marcados para serem analisados. O processo é analisado a partir de uma cadeia simples do DNA sequenciado esta servirá de molde para gerar outra metade complementar da dupla hélice, sendo obtido pela desnaturação. A reação de síntese se processa em condições iônicas e de pH apropriado na presença da enzima de DNApolimerase, de DNTP’S e o PRIMER. O método de degradação química consiste no tratamento com substâncias químicas que cortam a molécula de DNA em nucleotídeos específicos. O sequenciamento automático ocorre a substituição das técnicas por radioatividade pelo uso de marcadores fluorescentes, utiliza sequenciadores com eletroforese vertical ou em capilar, onde os DNTP’s possuem marcação com fluorescência, para a geração de fragmentos durante a reação os DNTP’s são adicionados a nova fita e no momento da adição a extensão da cadeia é interrompida e consequentemente marcada como didesoxinucleotideo incorporado. A reação de um sequenciamento ocorre no termociclador possuindo etapas, sendo elas: * Desnaturação: Eleva-se o DNA há uma temperatura de 96 C por dois minutos,