Viabilidade de micobactérias em cartão de fta® para extração de dna

CENTRO UNIVERSITÁRIO SÃO CAMILO
Curso de Ciências Biológicas

Fabio Glass Lopes

VIABILIDADE DE MICOBACTÉRIAS EM CARTÃO DE FTA® PARA EXTRAÇÃO DE DNA

São Paulo
2010
CENTRO UNIVERSITÁRIO SÃO CAMILO
Curso de Ciências Biológicas

Fabio Glass Lopes

VIABILIDADE DE MICOBACTÉRIAS EM CARTÃO DE FTA® PARA EXTRAÇÃO DE DNA

Trabalho de Conclusão de Curso de Graduação em Ciências Biológicas do Centro Universitário São Camilo. Orientador: Prof. Ms. Paulo Fernando Rodrigues.

São Paulo
2010
Fabio Glass Lopes

VIABILIDADE DE MICOBACTÉRIAS EM CARTÃO DE FTA® PARA EXTRAÇÃO DE DNA

São Paulo, 28 de outubro de 2010

Professor Orientador

Professor Examinador

Resumo

Com a finalidade de avançar no diagnóstico molecular da tuberculose, uma nova técnica de extração e preservação de DNA de micobactérias está sendo proposta através da impregnação de papel filtro, chamado cartão de FTA®, que possui afinidade por ácidos nucléicos, permitindo com isso a extração do DNA da amostra clínica ou de isolado e a preservação deste por períodos superiores a 15 anos. Contudo, baseando-se na grande resistência natural das micobactérias às condições ambientais, o presente projeto avaliou a presença de Mycobacterium bovis e de outras micobactérias viáveis e a segurança biológica do material impregnado em cartão de FTA® por até 8 semanas de armazenamento. Foram utilizadas 3 culturas micobacterianas, M. bovis AN5, M. avium D4 e M. fortuitum. Foram preparadas suspensões na escala 1 McFarland de cada das três micobatérias e, a partir dessa suspensão, uma diluição seriada na base 10 até a quinta diluição. 0,1 ml das diluições 10-3, 10-4 e 10-5 foram semeados em 3 tubos de Löwenstein-Jensen, incubando-os a 37°C, a fim de se fazer a contagem das unidades formadoras de colônias (UFC/ml) da solução mãe. Os cartões foram armazenados em temperatura ambiente e ao abrigo de luz. Fragmentos dos cartões (3 discos de 3mm para cada cartão) foram