Técnica de Manipulação do DNA

Técnica de Manipulação do DNA

Utilização (Possibilidades)

Como é feito?

Eletroforese

É uma técnica baseada na separação que ocorre entre partículas quando elas são dissolvidas ou suspensas em um eletrólito, através do qual uma corrente elétrica aplicada. É também usada na identificação de substancias, no estudo de homogeneidade de sistemas biológicos e na determinação de pontos isoelétricos.
Consiste na migração de moléculas ionizadas em solução, de acordo com suas cargas elétricas. Utilizam matrizes rígidas.
Eletroforese em Gel:
As partículas da molécula são carregadas negativamente por um composto, denominado SDS.
Eletroforese Capilar:
Emprega-se em um tubo capilar, preenchido com um eletrólito, tendo como principal vantagem o uso de capilares com diâmetros internos extremamente pequenos.

PCR
Passou-se a utilizar a técnica do PCR para fazer milhares de copias de um único pedaço de DNA. Essa técnica é usada em tubos e ensaio contendo o DNA e mais alguns compostos necessários, como primers (DNAs iniciadores) e a enzima DNA polimerase (enzima que faz a replicação do DNA).
O PCR possui cinco fases:
I - A amostra de DNA, a enzima que faz a replicação (DNA polimerase), os nucleotídeos de DNA e os primers complementares a sequência de DNA são colocados em um tubo de ensaio.
II- Coloca-se o tubo de ensaio em uma máquina de PCR (máquina que aumenta e diminui a temperatura de acordo com um programa).
III - Aquece-se o tubo a 94ºC para desnaturar (separar a dupla fita) o DNA.
IV - Cada fita simples do DNA que foi desnaturado serve de molde para a síntese de novas cadeias complementares. Para isso resfria-se a 54ºC onde os primers se anelam ao início das duas fitas simples, servindo de iniciadores para a enzima polimerase.
V - Aquece-se novamente o tubo a 72ºC (temperatura ideal de funcionamento da DNA polimerase) para a duplicação da fita. A DNA polimerase inicia, após o final do primer, a colocar os nucleotídeos livres na fita de DNA ligando-os por