Ralatorio de Laboratorio de Bioquimica

AULA PRÁTICAS Nº7 - Propriedades da Proteínas
Docente: Prof. Alexandre Borges
Disciplina: Bioquímica II

INTRODUÇÃO
OBJETIVO
O objetivo desta aula de propriedades das proteínas foi executar testes qualitativos para reconhecimento das propriedades das proteínas e assim definir desnaturação e precipitação salina.

MATERIAIS E MÉTODOS Tubos de ensaios
Pinça para tubos de ensaio
Pipetas graduadas: 1 ml, 2 ml, 10 ml
Papel de filtro
Funis de vidro
Espátula
Bequeres
1 termômetro

REAGENTES
Solução de albumina de ovo a 0,5% em tampão acetato de sódio a 0,025 M; pH = 4,5.
Solução de glicina a 2%
Solução de ácido tricloroacético a 2%
Solução de ácido pícrico a 5%
Solução de cloreto férrico a 1%
Solução saturada de (NH4)2SO4 leite Solução de gelatina
Tampão acetato de sódio pH 6,0; 4,7 e 3,5 álcool etílico a 95%
NaOH 2N
Solução de HCl 2N
Espátula
Solução de CuSO4 1%

PROCEDIMENTO
I- Desnaturação pelo calor
Pegamos 4 tubos de ensaios e numerámos de 1 a 4, a cada um dos 4 tubos adicionamos 4 ml de solução de albumina de ovo a 1% em tampão acetato de sódio de 0,0025 M pH=4,5 e aquecemos cada um dos tubos durante dois minutos nas seguintes temperaturas

Tubo 1 – 100oC
Tubo 2 – 80oC
Tubo 3 – 60oC
Tubo 4 – 40oC

Aquecemos 250 ml de água até a ebulição, nesta temperatura, aquecemos o tubo 1. Após aquecer o tubo 1, adicionamos água fria até atingir 80oC; aquecemos então o tubo 2. Adicionamos água fria até atingir 60oC; aquecemos o tubo 3. Adicionamos água fria até atingir 40oC, aqueça o tubo 4. Filtramos no tubo utilizando papel de filtro pré-umedecido em água. Foi retirado a cada tudo 0,3 ml e fizemos a reação de biureto, do seguinte modo: a cada tubo contendo 0,3 ml adicionamos 1 ml de NaOH 2N e, gota a gota, CuSO4 a 1%

II- Precipitação pelos agentes dos alcaloides
Pegamos 2 tubos de ensaio colocamos 2 ml das soluções de glicina e albumina de ovo separadamente. A cada um dos tubos adicionamos 3 ml de ácido