Protocolos M Dulo III

Laboratórios Integrados em Bioengenharia
Mestrado em Bioengenharia
Sanna Sillankorva

MÓDULO III – TÉCNICAS DE SEPARAÇÃO E PURIFICAÇÃO
DE BIOPRODUTOS
Objectivos: Aplicar os princípios básicos das técnicas de separação de bioprodutos na elaboração de experiências e interpretação de resultados.
Trabalhos:
TP1 – Electroforese (SDS-PAGE)
TP2– Ultrafiltração: Hemofiltração
TP3 – Diálise
TP4 – Rutura celular
Funcionamento das aulas
Os alunos devem formar 5 grupos de trabalho. Cada grupo irá executar cada um dos trabalhos práticos acima indicados de acordo com o cronograma a seguir apresentado. Em cada aula, todos os trabalhos funcionarão em simultâneo.
Trabalho/dia
16 nov.
23 nov
30 nov.
7 dez.
14 dez.

TP1
Grupo 1
Grupo 2
Grupo 3
Grupo 4

TP2
TP3
Apresentação e curvas de calibração
Grupo 2
Grupo 3
Grupo 3
Grupo 4
Grupo 4
Grupo 1
Grupo 1
Grupo 2

TP1: Electroforese
TP2: Filtração tangencial sem circulação de permeado – hemofiltração
TP3: Diálise
TP4: Rutura Celular

TP4
Grupo 4
Grupo 1
Grupo 2
Grupo 3

Mestrado em Bioengenharia

Laboratórios Integrados

1. ELECTROFORESE
1.1 INTRODUÇÃO
Sob a influência de um campo eléctrico, em solução aquosa, moléculas e partículas com carga eléctrica migram na direcção do eléctrodo de carga oposta. Devido à diferente dimensão das moléculas (ou partículas) e diferente número de cargas, estas moléculas (ou partículas) migram a diferente velocidade, sendo, como tal, separadas.
A velocidade a que as moléculas (ou partícula), migram (= mobilidade electroforética) é um seu parâmetro característico, dependendo de: (i) pK do(s) seu(s) grupo(s) carregado(s) e da sua dimensão (ii) do pH, força iónica e sais da solução aquosa onde estão dissolvidos (os suspensos), (iii) da temperatura, e (iv) da força do campo eléctrico. A mobilidade electroforética relativa de substâncias é normalmente determinada por comparação com a mobilidade de uma substância padrão.
Há vários processos de separação que exploram este tipo de mobilidade, sendo os dois
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