Perfil em SDS-PAGE das proteínas do plasma seminal
RESUMO EXPLICADO
Pra começar a simplificar pra você, grau de congelabilidade do sêmen leva em consideração o quanto de espermatozóide continua viável depois de ser congelado. Quanto mais espermatozóides continuarem vivos mesmo depois de congelados e descongelados, maior o grau de congelabilidade do sêmen do touro. Os animais com sêmen de alta congelabilidade foram aqueles cuja porcentagem de ejaculados viáveis pós-descongelação foi superior a 80%. O grupo de baixa congelabilidade tinha animais com porcentagem menor que 50% de ejaculados viáveis pós-descongelação. A avaliação do sêmen é feita de acordo com o Departamento de Produção Central de Inseminação Artificial. Uma vez por semana, durante 4 semanas, foram feitas coletas nos touros usando vagina artificial, usando o método de centrifugação a 1.500g de 15 a 20 minutos a 4ºC, momentos após a coleta.
Depois de coletado, o plasma seminífero passou por um processo que vou descrever aqui de forma simples:
• O plasma foi dialisado em membrana de celulose, tampão Tris-Glicina em pH-7,4 (mais básico do que ácido, para conservar os espermatozóides, IMPORTANTE FALAR ISSO), por 24 horas a 4ºC, com agitação lenta e constante.
• Todas as amostras foram padronizadas em 1,0mg/ml de PROTEÍNA TOTAL, ou seja, todas as amostras de sêmen tinham ESSA QUANTIDADE DE PROTEÍNA. Foram DILUÍDAS em tampão Tris-HCl (ácido clorídrico) 62mM em pH-6,2 mais 20% de glicerol e 4% de SDS.
• Depois, passaram por um procedimento chamado ELETROFORESE do tipo SDS-PAGE, e corridas em gel a 13%, durante 5 horas.
• Por último, a coloração do gel foi feita com Coomassie Brilliant Blue.
ESSES PROCEDIMENTOS O NÉLIO ~NÃO~ EXIGE TANTO, mas se você souber, é legal pros seus colegas entenderem como é feita análise/conservação de sêmen bovino. Mas se sentir dificuldade em explicar, fala que o SÊMEN PASSOU POR UM PROCEDIMENTO