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CAPA
INTRODUÇÃO
Segundo Motta (2009, p.15), a fotometria e a espectrofotometria estudam a medição das grandezas relativas à emissão, à recepção e à absorção da luz. Em bioquímica clínica, tais medições são essenciais para a compreensão de disfunções metabólicas desencadeadas por alguma patologia. Ainda de acordo o autor, as medições são analisadas quantitativamente baseadas na absorção de luz por soluções, como por exemplo, urina, plasma ou soro.
Dependendo da natureza da solução que será examinada, obtêm-se os espectros de absorção da luz, de modo que a imagem espectral pode servir para a identificação e quantificação de uma determinada substância.
PROCEDIMENTO
O procedimento de determinação da dosagem de colesterol no plasma sanguíneo se deu nos seguintes passos:
Diluir a amostra de soro para uma concentração de 2%:
Colocar 1000µl de soro fisiológico em um eppendorf .Adicionar 20 µl do soro sanguíneo.
Homogeneizar.
Rotular 3 eppendorf como B, T, P.
Adicionar em cada eppendorf 1ml do Reagente 1.
Adicionar 10 µl da amostra (soro sanguíneo) no tudo T.
Adicionar 10 µl da solução padrão no tubo P.
Homogeneizar os tubos e incubar em banho Maria (37°C) por 10 minutos.
Transferi as soluções B, T e P para as cubetas devidamente identificadas.
Levar as cubetas ao Espectrofotômetro e proceder às leituras das absorbâncias:
Ajustar o aparelho para um comprimento de onda de 505nm.
Colocar a cubeta B e zerar o aparelho (zero de absorbância/100% de transmitância).
Colocar a cubeta P e anotar a absorbância.
Colocar a cubeta T e anotar a absorbância.
Calcular a concentração de T:
Em seguida foi calculada a concentração através da seguinte fórmula:
Colesterol (mg/dL) = Absorbância da amostra T X concentração do P
Absorbância do P
Aplicando os dados obtidos no procedimento anterios à formula, temos:
Colesterol (mg/dL) = Absorbância da amostra T X concentração do P
Absorbância do P
CONCLUSÃO